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介绍
检测原理： 核因子κB受体活化剂配体(RANKL)ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法。向预包被了抗体的微孔板中，加入标准品和待测样本，温育后，加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。经过温育和洗涤结合形成的免疫复合物，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子浓度呈正相关。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，通过绘制标准曲线计算出样本待测因子的浓度。 适用样本： 血清、血浆、细胞培养上清液和组织等。 实验方法： 双抗夹心法。 半岛bd体育手机客户端 别名： TNFSF11；CD254；ODF；OPGL；OPTB2；RANKL；TNLG6B；TRANCE；hRANKL2；sOdf；TNF superfamily member 11；tumor necrosis factor ligand superfamily member 11；TNF-related activation-induced cytokine；osteoclast differentiation factor；osteoprotegerin ligand；receptor activator of nuclear factor kappa B ligand；tumor necrosis factor (ligand) superfamily, member 11；tumor necrosis factor ligand 6B；tumor necrosis factor superfamily member 11；核因子κB受体活化剂配体(RANKL)；核因子κB受体活化因子配基(RANKL)；骨保护素配体(OPGL)；破骨细胞分化因子(ODF)；核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)；肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)；核因子κB受体活化因子配体(RANKL)；肿瘤坏死因子配体超家族成员11(TNFSF11)；核因子kb受体活化因子配基(RANKL)；核因子kb受体活化因子配基(nbsp;RANKL)；核因子kb受体活化因子配基( RANKL)；破骨细胞异化因子(sRANKL)；肿瘤坏死因子相关激活诱导因肿瘤坏死因子配体超家族成1/核因子κB受体活化因子配基；肿瘤坏死因子相关激活诱导因子；肿瘤坏死因子相关激活诱导因子/肿瘤坏死因子配体超家族成员11/核因子κB受体活化因子配基；受体激活核因子(sRANK Ligand)；核因子κB受体活化因子配体(sRANK Ligand/TNFSF11/TRANCE)；核因子κB受体激活因子配基(RANκL)；核因子κB受体启动因子配基；核因子κB受体活化因子配基 核因子卡帕-Β配体受体激活剂（RANKL），又称肿瘤坏死因子配体超家族成员11（TNFSF11）、TNF相关活化诱导细胞因子（TRANCE）、骨保护素配体（OPGL）和破骨细胞分化因子（ODF），由TNFSF11基因编码的蛋白质。RANKL被称为II型膜蛋白，是肿瘤坏死因子（TNF）超家族的成员。它已被确认可以影响免疫系统并控制骨的再生和重塑。RANKL是一个凋亡调节基因，是骨保护素（OPG）的结合伙伴，是受体RANK的配体，通过改变Id4、Id2和细胞周期蛋白D1的蛋白水平控制细胞增殖。 它在多个组织和器官中表达，包括：骨骼肌、胸腺、肝脏、结肠、小肠、肾上腺、成骨细胞、乳腺上皮细胞、前列腺和胰腺。RANKL在多个器官中的浓度水平变化再次证实了它L在体内组织生长（尤其是骨骼生长）和免疫功能中的重要性。 试剂盒组分 ELISA酶标板、标准品、生物素化抗体、浓缩HRP酶结合物、酶结合物稀释液、生物素化抗体稀释液、标准品&样品稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液(TMB)、反应终止液、封板覆膜 需自备物品 1.酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ； 2.洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）； 3.高精度单道加液器； 4.高精度多道加液器； 5.37℃恒温箱； 6.低温离心机； 7.纯净水或蒸馏水。 操作步骤 1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃； 2.分别将标本或不同浓度的标准品加入相应孔中(100μl/孔)， 37℃孵箱孵育90分钟； 3.弃掉板内液体，洗板2次； 4.加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)，37℃孵箱孵育60分钟；弃掉板内液体，洗板3次； 5.除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱，避光孵育30分钟；弃掉板内液体，洗板5次 6.加入TMB显色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，当标准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟； 7.加入终止液（包括空白孔）100μl/孔，混匀后即刻测量OD（450nm）值(10分钟内)。 8.计算标本待测因子含量。 注意事项 1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。 2.浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶完全溶解后再配制洗涤液。 4.实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活。 5.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 6.配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器（使用最低频率），如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。 7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。 8.酶免实验中标准品和样本检测时建议作复孔。 9.将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2-8℃保存。 10.显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中。 12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm. 13.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。 14.各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 15.每次试验测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。 16.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 17.以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时， 用带纸屑的吸水材料应慎重， 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。 18.用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值。 19.进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值。 20.标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 21.试验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右； 22.为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定。 精密度 批间差:CV%<10%；批内差:CV%<8% 储存 -20℃,短期4℃ 有效期 12个月 |
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