| 品牌: 美国 NewEast Biosciences |
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| 货号: 82501 |
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| 规格: 30 Assays |
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全名: Rab7 Pull-Down Activation Assay Kit |
| 应用: Pull-down |
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| 监测: Active Rab7-GTP level |
Rab7 Pull-Down Activation Assay Kit
Cat. # 82501
Introduction
A. Background
小的gtpase是一个超级家族的细胞信号调节器。小的ras样GTPase Rab7是一种进化保守蛋白，最初因其能够恢复ras转化成纤维细胞的形态表型而引起人们的兴趣。Rab7受大量刺激调控，包括生长因子和细胞因子，也包括物理力和渗透胁迫。Rab7被证明可以调节多种基本细胞过程。Rab7在内皮细胞中的功能研究最多的方面涉及其在细胞-细胞连接形成和重塑中的调节作用。
Rab7活化检测试剂盒基于结构特异性单克隆抗体，特异性识别Rab7- gtp，但不识别Rab7- gdp。由于单克隆抗体对其抗原的高亲和力，可以在短时间内进行活化试验。该方法提供了可靠的结果和一致的重复性。
该抗Rab7- gtp单克隆抗体还可用于监测Rab7在细胞和组织中的活化。
B. Assay Principle
Rab7激活检测试剂盒使用结构特异性抗Rab7- gtp小鼠单克隆抗体来测量细胞提取物或体外GTPγS负载Rab7激活试验中的Rab7- gtp水平。抗Rab7-GTP小鼠单克隆抗体首先与含有Rab7-GTP的细胞裂解液孵育。接下来，gtp结合的Rab7被蛋白A/G琼脂糖拉下。最后，采用抗rab7兔多克隆抗体(Anti-Rab7 Rabbit Polyclonal Antibody)进行免疫印迹检测沉淀的Rab7-GTP。
C. Kit Components
1. Anti-Rab7-GTP Mouse Monoclonal Antibody (Cat. # 26923): One vial – 35 μL (1 mg/ml) in PBS, pH 7.4, containing 50% glycerol. This antibody specifically recognizes Rab7-GTP from all vertebrates.
2. Protein A/G Agarose (Cat. # 30301): One vial – 600 μL of 50% slurry.
3. 5X Assay/Lysis Buffer (Cat. # 30302): One bottle – 30 mL of 250 mM Tris-HCl, pH 8, 750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100.
4. Anti-Rab7 Rabbit Polyclonal Antibody (Cat. # 21069): One vial – 50 μL (1 mg/mL) in PBS, pH 7.4, contained 50% glycerol.
5. 100X GTPγS (Cat. # 30303): One vial – 50 μl at 10 mM, use 5 μL of GTPγS for GTP-labeling of 0.5 mL of cell lysate.
6. 100X GDP (Cat. # 30304): One vial – 50 μl at 100 mM, use 5 μL of GDP for GDP-labeling of 0.5 mL of cell lysate.
7. HRP-Goat Anti-Rabbit IgG (Cat. #29002): 50 μL (0.4 mg/mL) in PBS, pH 7.4, contained 50% glycerol.
D. Materials Needed but Not Supplied
1. Stimulated and non-stimulated cell lysates
2. Protease inhibitors
3. 4 °C tube rocker or shaker
4. 0.5 M EDTA at pH 8.0
5. 1.0 M MgCl2
6. 2X reducing SDS-PAGE sample buffer
7. Electrophoresis and immunoblotting systems
8. Immunoblotting wash buffer such as TBST (10 mM Tris-HCl, pH 7.4, 0.15 M NaCl, 0.05% Tween-20)
9. Immunoblotting blocking buffer (TBST containing 5% Non-fat Dry Milk or 3% BSA)
10. ECL Detection Reagents
E. Example Results
下图展示了Rab7激活检测试剂盒的示例结果。仅供参考。
Rab7激活试验。纯化的gst标记Rab7蛋白(Cat。#10134)用抗rab7 - gtp单克隆抗体(Cat。第26923号)经GDP(通道1)或GTPγS(通道2)处理后，用抗rab7多克隆抗体(Cat。# 21069)。输入控件显示在底部面板中。
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