检测原理:
蛋白质分子具有-NH3+基团,当棕红色的考马斯亮兰显色剂加入蛋白标准液或样品中时,考马斯亮兰染料上的阴离子与蛋白-NH3+结合,使溶液变为蓝色,通过测定吸光度可计算出蛋白含量。
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优点:
1、灵敏度高:测定范围为0.2-1.3mg/ml比Lowry法约高四倍。这是因为蛋白质与染料结合后产生得到颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度得到变化比Lowry法要大的多
2、操作简便:单试剂操作,20分钟可以完成50例以上样本的测定。
3、由于染料与蛋白质结合过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,因而完全不用像 Lowry法那样费时和严格地控制时间。
4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效,呈色稳定好.
5、再现性好:批内CV=103%,批间CV=5.34%。
6、回收试验:X =101.8%。
7、受外界影响因素小:干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg+、Tris缓冲液、蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定方法
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及自备试剂:
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为595nm)
2、漩涡混匀器
3、微量移液器
储存条件:
本试剂盒保存期:6个月。贮存温度:2~8℃。