半岛bd体育手机客户端 组分

P2011
2×HSTMMix	1ml	1支
超纯水	1ml	1支
P2012
2×HSTMMix	1ml	1支×5
超纯水	1ml	1支×5

注： 本半岛bd体育手机客户端 分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的半岛bd体育手机客户端 ，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类半岛bd体育手机客户端 的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。

保存条件
-20℃保存2年。
请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。

半岛bd体育手机客户端 说明
HS^TMMix是2×浓缩的高特异性PCR预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染(加样次数减少)。HS^TMMix的反应体系经特殊优化，减少引物二聚体的形成，显著提高PCR扩增的特异性。同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。
Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb(简单模板)。延伸速度为0.9-1.2 kb/ min(70-75 ℃)。该酶具有5'→3'聚合酶活性，无3'→5'外切酶活性。

半岛bd体育手机客户端 特点
高特异性
使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
快速、高效：减少加样步骤，节约时间。
可重复：降低污染和加样错误风险

半岛bd体育手机客户端 用途
高特异性PCR检测
高通量PCR检测
高重复性PCR检测
制备TA克隆用的PCR产物

活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。

2×HS Mix的组分
50 mM KCl
20 mM Tris-Cl
3 mM MgSO₄
400 mM dNTP混合物
0.1 U/μlTaq DNA聚合酶
溴酚蓝等

应用举例
注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

以λDNA为模板，扩增1kb片段。

λ DNA(2.5 ng/μl)	1μl
Primer 1(10μM )	2μl
Primer 2(10μM)	2μl
2×HSTM TaqMix	25μl
dd H2O	补足至50μl

反应条件

95℃	3 min
95℃	30 sec
55~68℃	30 sec 30 Cycles
72℃	1 min
72℃	10 min

备注：
1、Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物的3'末端通常会加上1个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
2、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
3、模板DNA推荐用量(50 μl PCR反应体系)

人类基因组DNA	0.1 μg ---1 μg
λDNA	0.5 ng---5 ng
质粒DNA	0.1ng-10 ng
大肠杆菌DNA	10 ng-100 ng

4、HS^TMMix的扩增产物经纯化后可直接用于测序反应。

Q&A
问：为什么HS^TMMix的特异性会高于PCR Mix？
答：这是由于东盛对HS^TMMix反应缓冲液中的离子浓度等因素进行了优化。PCR引物在不同的离子浓度条件，与模板的结合能力差异显著。经过优化，HS^TMMix能够显著提高引物与模板结合的严谨性，从而提高PCR扩增的特异性，降低背景。在少数情况下，HS^TMMix的扩增效率可能低于PCR Mix。

问：HS^TMMix的扩增产物能否直接进行TA克隆？
答：直接进行TA克隆。