半岛bd体育手机客户端 组分

注：1、HS^TM Taq DNA聚合酶分为2.5 U/μl与5 U/μl两种包装，可自由选择，如没特别说明提供5 U/μl的包装。
    2、10×PCR 缓冲液分为Mg²⁺ Plus与Mg²⁺ Free两种包装，可方便选择。如没特别说明提供Mg²⁺ Plus缓冲液。Mg²⁺ Free的 10×PCR 缓冲液提供25 mM MgCl₂。
    3、电泳时，请按每5 μlPCR反应液中加入1μl的比例添加6×上样缓冲液  混合后进行电泳。
 
保存条件
    -20℃保存2年。多次冻融不影响生物学活性。
 
半岛bd体育手机客户端 说明
    HS^TM Taq DNA聚合酶(High Specificity Taq DNA polymerase)是针对普通 Taq DNA聚合酶灵敏度高，易产生非特异性条带的情况，专门研制的高特异性嗜热DNA聚合酶半岛bd体育手机客户端 。本半岛bd体育手机客户端 的反应缓冲液的离子种类和浓度都经过改良，使得引物与模板的特异性结合力显著增强，从而提高引物与模板结合的严谨性，减少非特异性扩增。实验数据证明。 HS^TM TaqDNA聚合酶能显著提高PCR扩增的特异性，降低背景，又能对长片段有较高的扩增效率。

半岛bd体育手机客户端 特点
    热稳定性好：95℃下半衰期超过40 min。
    PCR产物具有3'-dA，可直接用于T/A克隆。
    扩增特异性高。
 
半岛bd体育手机客户端 用途
    常规PCR扩增
    DNA标记
    DNA测序
    制备TA克隆用PCR产物
 
活性定义
    一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
 
质量控制
    相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，扩增活性无明显改变。
 
10×PCR缓冲液
  500 mM KCl
  100 mM Tris-Cl
  15 mM MgCl₂
  1% Triton-100
 
酶贮存液
  20mM Tris-HCl
  1mM DTT
  0.1mM EDTA
  100mM KCl
  50 % Glycerol
  1% Triton-100
 
应用举例
注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。
 
以λDNA为模板，扩增1kb片段。

 
PCR反应条件

 
注意事项
    1、HS^TM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性，因此在PCR产物3'末端通常会加上1个多余的腺嘌呤。
    2、碱基出错率是指在每个碱基合成过程中所掺入的错误核苷酸数目。HS^TM Taq DNA聚合酶的碱基错误率为1×10^-5。
    3、建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。
    4、模板DNA推荐用量(50 μl 标准PCR体系)

    5、如进行PCR扩增后，除目的条带外，还伴随其他杂带，建议适当减少体系中的Taq酶用量，以增加PCR扩增反应的特异性。
 
问：如何利用HS^TM Taq DNA聚合酶进行加A反应？
答：由高保真DNA 聚合酶(如Pfu)产生的PCR 扩增片段的纯化产物1-7μl；
    加入1μl HS^TM Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液(含MgCl₂)；
    加入dATP 至终浓度0.2 mM；
    加入5 U的HS^TM Taq DNA 聚合酶；
    加超纯水至终反应体积为10μl；
    70℃孵育15-30 分钟；
    进行TA克隆。