细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

特性：

安全性：所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

ATP依赖的RNA解旋酶A沉淀法miRNA分离试剂盒miRNA Isolation KitMICA 抗體 (FITC), 鼠單抗

B7-1一站式柱式miRNAoutOne-Stop Column miRNAOUT人 Serum Albumin / HSA / ALB 抗體 (FITC), 兔單抗

B7同系物6凝胶法miRNA分离试剂盒 CD86 / B7-2 抗體 (FITC), 鼠單抗

B7同源体1一站式大提柱式miRNAoutMaxi Column miRNAOUTCEACAM3 / CD66d 抗體 (PE), 鼠單抗

B7同源体2一站式动物mRNAoutOne-Stop Animal mRNA Isolation KitRELA / Transcription factor p65 / NFkB p65 抗體 (FITC), 鼠單抗

B7同源体3一站式磁珠法动物mRNAoutOne-Step MAG Animal mRNA Isolation KitCD48 / SLAMF2 抗體 (FITC), 兔單抗

Bcl-2相关X蛋白一站式全血mRNAoutOne-Stop Blood mRNA Isolation KitCD48 / SLAMF2 抗體 (PE), 兔單抗

BH3结构域凋亡诱导蛋白一站式磁珠法全血mRNA提取试剂盒CD40 / TNFRSF5 抗體 (FITC), 鼠單抗

Bmi-1基因一站式植物mRNAoutOne-Stop Plant mRNA Isolation KitTie2 / CD202b / TEK 抗體 (PE), 鼠單抗

BPDE-DNA加合物一站式磁珠法植物mRNAoutCD86 / B7-2 抗體 (PE), 鼠單抗

Brevican一站式真菌mRNAoutOne-Stop Fungal mRNA Isolation KitTie2 / CD202b / TEK 抗體 (FITC), 鼠單抗

B类清道夫受体1一站式磁珠法真菌mRNA提取试剂盒CEACAM6 / CD66c 抗體 (FITC), 兔單抗

B-淋巴细胞趋化因子1mRNA提取试剂盒mRNA Isolation KitP4HB 抗體 (FITC), 兔單抗

B细胞活化因子磁珠法mRNA提取试剂盒CEACAM8 / CD66b / CD67 抗體 (APC), 鼠單抗

B细胞淋巴瘤-XLOligo（dT）纤维素Oligo (dT) CelluloseCEACAM8 / CD66b / CD67 抗體 (FITC), 鼠單抗

B细胞淋巴瘤因子2Oligo（dT）再生溶液Oligo (dT) RechargerCD97 抗體 (PE), 兔單抗

B细胞淋巴瘤因子6生物素标记的Oligo（dT）Biotinylated Oligo (dT)CD97 抗體 (FITC), 兔單抗

C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1链霉亲和素磁珠Magnetic beads,StreptavidinCLEC4A / CLECSF6 / DCIR 抗體 (FITC), 鼠單抗

Ca-ATP酶固相RNase清除剂Surface RNase ErasolCD97 抗體 (PE), 鼠單抗

cAMP反应元件结合蛋白固相RNase清除剂Surface RNase ErasolS100A9 抗體 (FITC), 鼠單抗

CC趋化因子受体1气相RNase清除剂Air RNase ErasolCD97 抗體 (FITC), 鼠單抗

Lactose TTC agarTTC乳糖琼脂250g

MI MediumMI培养基1000ml

Neutral Red-bile Salt Peptone Glucose Medium结晶紫中性红胆盐肉汤250g

Coliform Medium（Japan）大肠菌群培养基（日本）250g

艾格LT100肉汤250g

Nutrient Broth（Japan）营养肉汤（日本标准）250g

SOC MediumSOC培养基250g

Aliz-gal Broth茜素-β-半乳糖苷肉汤（Aliz-gal肉汤）100g

Nutrient Agar（Agar 20g）营养琼脂（琼脂20g）250g

Methyl Red Voges Proskauer Broth缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR-VP试验用培养基）250g

DCLS Agar去氧胆酸盐枸橼酸盐乳糖蔗糖琼脂250g

Honda Toxin-Producing BrothHonda氏产毒肉汤250g

PSB（磷酸盐缓冲液pH7.2）9ml*20支/包

Modified Sclohtens' BrothModifiedSclohtens'Broth(MSB)250g

Dextrose Broth葡萄糖肉汤250g

the Smallest Broth Medium最小肉汤培养基250g

HB-PET Auto-Indection MediumHB-PET自诱导培养基250g

M-Endo Mediumm-远藤氏培养基250g

CAYE MediumCAYE培养基250g

Medium Ⅱ(for Transferring the Test Organism)接种测试微生物琼脂培养基250g

Medium I(foe Seed and Basal Layer)菌种和底层琼脂培养基250g

Inorganic Salt Medium无机盐培养基250g

Sucrose Tryptone Broth蔗糖胰蛋白胨肉汤200

双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）250g

Disinfectant Neutralization Broth消毒液中和肉汤250g

Lecithin polysorbate(LP)diluent卵磷脂吐温稀释液250g

A-1 MediumA-1培养基250g

M-Endo BrothM-Endo肉汤250g

CCFA Agar BaseCCFA琼脂基础250g

Double Lactose Bile Medium双料乳糖胆盐发酵培养基250g

Mossel-Enterobacteriaceae Enrichment Broth肠道菌增菌肉汤250g

MSA MediumMSA培养基250g

Agar Medium F(Violet Red Bile Glucose Agar)琼脂培养基F(紫红胆盐葡萄糖琼脂)250g

BIU87/ADR人膀胱癌阿霉素耐药株Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel肠道菌富集肉汤培养基（USP）250g

Gram Negative Bacteria Enrichment Broth革兰氏阴性菌增菌液250g

Coliphage MS2 Liquid Medium大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基250g

Coliphage MS2 Medium(Semisolid)大肠杆菌噬菌体MS2半固体培养基250g

GAD MediumGAD培养基250g

Enterobacter Cloacae Isolation Agar阴沟肠杆菌分离琼脂（ECIA）250g