小鼠二步法免疫组化试剂盒

一、试剂盒成份：

封闭液	3ml
增强剂	3ml
即用型羊抗小鼠酶标抗体	3ml

二、染色步骤：

1、 石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(0.01M，pH7.4)冲洗三次，每次3分钟(3x3min)。

2、 根据每种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。

3、 每张切片加1滴或50ul的3％H202，室温孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3x3min。

4、除去PBS液，每张切片加1滴或50ul封闭液，室温孵育10-30分钟。

5、除去封闭液，每张切片加1滴或50ul第×抗体(用5%牛血清白蛋白或PBS稀释)，室温孵育60分钟或4℃ 过夜，建议参见每种抗体的说明书。

6、PBS冲洗3x5min。除去PBS液，每张切片加1滴或50ul聚合物增强剂，室温孵育20分钟，PBS冲洗3x5min。

7、除去PBS液，每张切片加1滴或50ul酶标抗体，室温孵育20分钟，PBS冲洗3x5min。

8、除去PBS液，每张切片加1滴或50ul新鲜配制的DAB或AEC溶液，显微镜观察3~5分钟( DAB )或10分钟( AEC )，根据显色情况适时终止显色反应。

9、自来水冲洗，苏木素复染，若有必要，可用0.1％HCl分化，自来水冲洗，PBS返蓝。

10、如果用DAB显色，则切片经梯度酒精脱水干燥，(二甲苯透明)，中性树胶封片，如果用AEC显色，则切片不能酒精脱水，直接用水性封片剂。