双重探针法人类脲原体实时定量PCR试剂盒

Duplex Probe Real-time PCR Kit forUreaplasma parvum & Ureaplasma urealyticum

货号：Mqt-upr-20 规格：20个反应

货号：Mqt-upr-50 规格：50个反应

货号：Mqt-upr-100 规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1， 特异性检测并区分微小脲原体和解脲脲原体，可识别人类脲原体的全部十四种血清型，与其他生物基因组没有交叉反应。

2， 使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

3， 带有阳性对照样品（组分C），可用于检验试剂盒有效性。

4， 带有dUTP和UDG酶，可降低残留DNA的污染。

脲原体（Ureaplasma）是一类具有尿素分解能力的支原体，呈球状或球杆状，革兰氏阳性，克隆呈煎蛋状，细胞直径在0.1到1.0 μm 之间，于1954年**从人类泌尿生殖道分离出来，1974年首先被命名为解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum），人类中目前已知有14种血清型。经过多年的争论，在2002年，根据基因组大小、16S rRNA基因序列、16S-23S rRNA基因间隔区序列、酶的多态性、DNA-DNA杂交、对锰的分化反应、多带抗原基因等，将其区分为两种生物：解脲脲原体和微小脲原体（Ureaplasma parvum）。区分后的解脲脲原体包含的血清型有十种：2、4、5、7、8、9、10、11、12和13，微小脲原体包含的血清型有四种：1、3、6和14。不同血清型对人体疾病的影响目前尚没有一致结论。这两种脲原体是健康人常见的泌尿生殖道共生菌，可以单独或共同存在，有时也会与一些疾病相关联，如：尿道炎、产后子宫内膜炎、绒毛膜羊膜炎、自然流产、早产、低出生体重、肺炎、菌血症、脑脊膜炎和早产儿慢性肺病等。目前尚不清楚这些脲原体会在什么情况下引起疾病，体液免疫系统健全的人一般不会受其影响。

脲原体的体外培养非常困难，耗时较长，灵敏度较低。对脲原体的分型是依靠针对全细胞或纯化抗原的单克隆或多克隆抗体，实验方法包括：生长抑制实验、代谢抑制实验、免疫荧光、免疫过氧化物酶、ELISA、免疫印迹等，这些方法都比较耗时费力，结果常常难以重复，有很多交叉反应，在含有多个血清型的样本上常难以区分。而PCR法用于检测脲原体，则有更高的灵敏度和更好的特异性，不受其他微生物污染的影响，且检测时间短，仅需几个小时即可获得结果。定量PCR法与常规PCR法相比，不仅可以精确定量，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒选择脲原体特征性的尿素酶基因作为靶点，将脲原体14种血清型的序列进行比对，设计引物和探针，特异性识别并区分解脲脲原体和微小脲原体。使用本试剂盒可以准确区分脲原体14种血清型的生物分类，经BLAST验证，与其他生物基因组没有交叉反应。对42个分离培养样本进行检测，得到37个微小脲原体阳性，4个解脲脲原体阳性，以及一个双重阳性，与测序结果完全一致。对31个临床拭子样本进行检测，获得11个微小脲原体阳性，6个解脲脲原体阳性，与常规PCR法检测结果一致，阳性率高于体外培养法，显示本试剂盒灵敏度高于体外培养法。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil-?DNA?Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

UDG和dUTP用于消除PCR扩增中的残余污染。dUTP可以确保扩增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可从单链或双链DNA上去除尿嘧啶残基，从而阻止含有尿嘧啶的DNA作为模板继续扩增。UDG在正常的PCR循环过程中被高温灭活，对PCR反应没有影响。