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介绍
检测原理： 转化生长因子β(TGF-β)ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法。向预包被了抗体的微孔板中，加入标准品和待测样本，温育后，加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。经过温育和洗涤结合形成的免疫复合物，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子浓度呈正相关。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，通过绘制标准曲线计算出样本待测因子的浓度。 适用样本： 血清、血浆、细胞培养上清液和组织等。 实验方法： 双抗夹心法。 半岛bd体育手机客户端 别名： TGFB1；CED；DPD1；IBDIMDE；LAP；TGF-beta1；TGFB；TGFbeta；transforming growth factor beta 1；transforming growth factor beta-1 proprotein；TGF-beta-1；latency-associated peptide；prepro-transforming growth factor beta-1；transforming growth factor beta1；转化生长因子β(TGF-β)；转化生长因子β1(tgf-β1)；转化生长因子-β(TGF-β)；转移生长因子β1(TGF-β1)；转化生长因子β1(TGFB1)；转化生长因子β1；转移生长因子-β1(TGF-β1)；转化生长因子-β1(TGF-β1)；转化生长因子-β1；转化生长因子β 转化生长因子β（TGF-β）是一种多功能的细胞因子，属于转化生长因子超家 族，包括三种不同的哺乳动物异构体（TGF-β 1 至 3，HGNC 符号 TGFB1、 TGFB2、TGFB3）和许多其他信号蛋白。TGFB 蛋白由所有白血球系产生。 被激活的 TGF-β与其他因子复合形成丝氨酸/苏氨酸激酶复合物，与 TGF-β 受体结合。TGF-β受体由 1 型和 2 型受体亚单位组成。TGF-β结合后，2 型 受体激酶磷酸化并激活 1 型受体激酶，从而激活一个信号级联。这导致不同 的下游底物和调节蛋白的激活，诱导不同靶基因的转录，在分化、趋化、增 殖和许多免疫细胞的激活中发挥作用。TGF-β由包括巨噬细胞在内的许多细 胞类型分泌，呈潜伏状态，与另外两种多肽--潜伏的 TGF-β结合蛋白（LTBP） 和潜伏的相关肽（LAP）复合。血清蛋白酶如浆蛋白酶催化活性 TGF-β从复 合物中释放。这通常发生在巨噬细胞的表面，潜伏的 TGF-β复合物通过其配 体血栓软骨素-1（TSP-1）与 CD36 结合。激活巨噬细胞的炎症刺激物通过 促进血浆蛋白的激活而增强活性 TGF-β的释放。巨噬细胞还可以内吞由浆细 胞分泌的 IgG 结合的潜伏 TGF-β复合物，然后将活性 TGF-β释放到细胞外液 中。其主要功能之一是调节炎症过程，特别是在肠道。TGF-β还在干细胞分 化以及 T 细胞调节和分化中发挥关键作用。由于其在免疫和干细胞调节和分 化中的作用，它是癌症、自身免疫性疾病和传染病领域中研究较多的一种细 胞因子。TGF-β超家族包括内源性生长抑制蛋白；TGF-β表达的增加往往与 许多癌症的恶性程度和细胞对 TGF-β的生长抑制反应的缺陷相关。其免疫抑 制功能的失调也与自身免疫性疾病的发病机制有关，尽管其作用是由存在的 其他细胞因子的环境介导的。 试剂盒组分 ELISA酶标板、标准品、生物素化抗体、浓缩HRP酶结合物、酶结合物稀释液、生物素化抗体稀释液、标准品&样品稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液(TMB)、反应终止液、封板覆膜 需自备物品 1.酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ； 2.洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）； 3.高精度单道加液器； 4.高精度多道加液器； 5.37℃恒温箱； 6.低温离心机； 7.纯净水或蒸馏水。 操作步骤 1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃； 2.分别将标本或不同浓度的标准品加入相应孔中(100μl/孔)， 37℃孵箱孵育90分钟； 3.弃掉板内液体，洗板2次； 4.加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)，37℃孵箱孵育60分钟；弃掉板内液体，洗板3次； 5.除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱，避光孵育30分钟；弃掉板内液体，洗板5次 6.加入TMB显色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，当标准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟； 7.加入终止液（包括空白孔）100μl/孔，混匀后即刻测量OD（450nm）值(10分钟内)。 8.计算标本待测因子含量。 注意事项 1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。 2.浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。 3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶完全溶解后再配制洗涤液。 4.实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活。 5.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 6.配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器（使用最低频率），如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。 7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。 8.酶免实验中标准品和样本检测时建议作复孔。 9.将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2-8℃保存。 10.显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中。 12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm. 13.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。 14.各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 15.每次试验测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。 16.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 17.以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时， 用带纸屑的吸水材料应慎重， 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。 18.用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值。 19.进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值。 20.标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 21.试验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右； 22.为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定。 精密度 批间差:CV%<10%；批内差:CV%<8% 储存 -20℃,短期4℃ 有效期 12个月 |
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