核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，根据化学组成不同核酸可分为脱氧核糖核酸 (简称 DNA)和核糖核酸(简称 RNA)，核酸分子中含有一定比例的磷，DNA中磷含量为 9.2%， RNA中磷含量为 9.0%。

5′-核苷酸检测试剂盒(过碘酸氧化比色法)检测原理是 5′-核苷酸核糖基的 2′、3′碳原子都有羟基，这两个碳原子之间的键较弱，过碘酸可氧化使其断裂生成二醛化合物，后者与甲胺基生成化合物，该化合物在酸性条件下脱下磷酸基，测定该无机磷量，即得 5′-核苷酸，无机磷与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵，随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子，进而形成蓝色的钼蓝，在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比，在660nm处检测吸光度，通过检查标准曲线获得磷含量，同时为了消除其他无机磷的干扰，测定未经过碘酸氧化的无机磷，予以扣除，即为准确的 5′-核苷酸磷。该试剂盒的特点是专一测定 5′-核苷酸。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、蒸馏水、粗制 AMP或其他核酸

2、水浴锅、离心管或试管、分光光度计、比色杯

1、稀释标准品：取适量的磷标准(1mg/ml)，按磷标准(1mg/ml)：蒸馏水=1：99的比例稀释标准品至 10μg/ml，取干净离心管或试管，按下表进行标准品浓度的依次稀释，获得不同浓度的多个磷标准。

2、制备待测样液：取用粗 AMP水解液或 RNA水解液，作为待测样液。

3、配制定磷试剂：称取 1g定磷试剂 C加入 10ml蒸馏水，充分溶解，即为定磷试剂 C溶液。按 E1：E2：E3(定磷试剂 C溶液)=3：1：1混匀，即为定磷试剂，即配即用。

【注】定磷试剂 C溶液 4℃避光可以保存 1～2月，呈深黄色至棕色即失效。定磷试剂混合液配置后当天使用，正常颜色为黄色或黄绿色，如呈棕黄色或深绿色则失效。

4、磷加样：按下表进行操作，依次加入下列溶液，不能颠倒，每加一种试剂，必须充分混匀。如果样品中有无机磷，应同时检测无机磷，并将无机磷扣除。

4、磷测定：空白管调零，比色杯光径 1cm，分光光度计测定 660nm处标准管、氧化管、未氧化管的吸光度(分别记为 A标准、A氧化、A未氧化)。

以系列磷含量(μg/ml)(1～10号)为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得标准曲线。氧化管为样液中所有磷的含量，未氧化管为样液未氧化前无机磷的含量，二者差值即为样液中5′-核苷酸磷含量。按下列公式计算样液中 5′-核苷酸的含量：

5′-核苷酸含量(mg/ml)=(C*M/31)×(N/1000)

式中：C=5′-核苷酸磷的质量浓度(μg/ml)

M=所测核苷酸相对分子量，如样液是 RNA水解液，则四种核苷酸的平均相对分子量为 340。

31=磷的相对原子质量 N=样液稀释倍数

1000=由μg换算为 mg的倍数

1、待测样品如不能及时测定，应置于 2～8℃保存，3天内稳定。

2、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

3、定磷试剂 A有腐蚀性，应小心操作。

4、定磷试剂 C溶液 4℃避光可以保存 1～2月，呈深黄色至棕色即失效。

5、定磷试剂配制后当天使用，正常颜色为黄色或黄绿色，如呈棕黄色或深绿色则失效。

6、在加样时，加入试剂的顺序应严格按照表格操作，不能颠倒，且加完后应充分摇匀并准确计时。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。