【半岛bd体育手机客户端 名称】

通用名称：猫瘟病毒(FPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

Name：Feline Panleukopenia Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】10T/盒

【预期用途】

猫泛白细胞减少症，也称猫瘟热，是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline Panleuk -openia Virus, FPV）引起的一种高度接触性传染病。该病在自然条件下可感染猫科、浣熊科和鼬科等动物，感染比较普遍。FPV传播性强，感染动物可通过粪便、呕吐物、鼻涕、唾液、尿液排出病毒从而污染食具、笼子、垫物和周围环境，妊娠母猫也可垂直传播给胎儿，跳蚤和吸血昆虫可成为传播媒介。FPV致病性强，妊娠母猫胎儿畸形胎甚至流产，死亡率高且无任何前驱症状^[1]。

本试剂盒适用于检测泄殖腔棉拭子、粪便、全血，病死猫的肠道等样本中的猫瘟病毒，用于猫瘟病毒感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，设计一对猫瘟病毒基因组特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对猫瘟病毒基因组的DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

包装规格	25T/盒	50T/盒
FPV反应液	500μL×1管	500μL×2管
酶液	25μL×1管	50μL×1管
FPV阳性质控品	50μL ×1管	50μL ×1管
阴性质控品	250μL ×1管	250μL ×1管

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过5次，有效期12个月。

【适用半岛游戏平台官网入口网址】ABI 、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

【标本采集】患病猫等动物：泄殖腔棉拭子、粪便、全血；病死猫：肠道内容物

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

组织样品：每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g，手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中；咽拭子样品直接取100μL于1.5mL灭菌离心管中。

1.2核酸提取

推荐采用我司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照；样品每满10份，多配制1份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂	FPV反应液	酶液
用量（样本数为N）	20μL	1μL

将混合好的测试反应液分装到PCR反应管中，21uL/管。

3.加样（样本处理区）

将步骤1提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；

荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列半岛游戏平台官网入口网址 请勿选择ROX参比荧光，选择None即可。

4.3 推荐循环参数设置：

步骤	循环数	温度	时间	收集荧光信号
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

【注意事项】

1.所有操作严格按照说明书进行；

2.试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

3.反应液应避光保存；

4.反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

5.使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

6.样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

7.实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

8.试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。