BIU87/ADR人膀胱癌阿霉素耐药株
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BIU87/ADR
人膀胱癌阿霉素耐药株
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细胞特性: 1)组织来源于实验动物的正常眼组织。 2)细胞鉴定:细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。 3)经鉴定细胞纯度高于90%。 4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。 5)细胞生长方式:上皮样,不规则细胞,贴壁培养。
特性: 安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后,在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况 (一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。 (二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下: 1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。 2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒放于37℃培养箱1-3分钟预热,之后翻转培养瓶10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。 3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。 注意事项: 1、观察细胞zui好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。 2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。 3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。 4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们。 实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 ATP依赖的RNA解旋酶A沉淀法miRNA分离试剂盒miRNA Isolation KitMICA 抗體 (FITC), 鼠單抗 B7-1一站式柱式miRNAoutOne-Stop Column miRNAOUT人 Serum Albumin / HSA / ALB 抗體 (FITC), 兔單抗 B7同系物6凝胶法miRNA分离试剂盒CD86 / B7-2 抗體 (FITC), 鼠單抗 B7同源体1一站式大提柱式miRNAoutMaxi Column miRNAOUTCEACAM3 / CD66d 抗體 (PE), 鼠單抗 B7同源体2一站式动物mRNAoutOne-Stop Animal mRNA Isolation KitRELA / Transcription factor p65 / NFkB p65 抗體 (FITC), 鼠單抗 B7同源体3一站式磁珠法动物mRNAoutOne-Step MAG Animal mRNA Isolation KitCD48 / SLAMF2 抗體 (FITC), 兔單抗 Bcl-2相关X蛋白一站式全血mRNAoutOne-Stop Blood mRNA Isolation KitCD48 / SLAMF2 抗體 (PE), 兔單抗 BH3结构域凋亡诱导蛋白一站式磁珠法全血mRNA提取试剂盒CD40 / TNFRSF5 抗體 (FITC), 鼠單抗 Bmi-1基因一站式植物mRNAoutOne-Stop Plant mRNA Isolation KitTie2 / CD202b / TEK 抗體 (PE), 鼠單抗 BPDE-DNA加合物一站式磁珠法植物mRNAoutCD86 / B7-2 抗體 (PE), 鼠單抗 Brevican一站式真菌mRNAoutOne-Stop Fungal mRNA Isolation KitTie2 / CD202b / TEK 抗體 (FITC), 鼠單抗 B类清道夫受体1一站式磁珠法真菌mRNA提取试剂盒CEACAM6 / CD66c 抗體 (FITC), 兔單抗 B-淋巴细胞趋化因子1mRNA提取试剂盒mRNA Isolation KitP4HB 抗體 (FITC), 兔單抗 B细胞活化因子磁珠法mRNA提取试剂盒CEACAM8 / CD66b / CD67 抗體 (APC), 鼠單抗 B细胞淋巴瘤-XLOligo(dT)纤维素Oligo (dT) CelluloseCEACAM8 / CD66b / CD67 抗體 (FITC), 鼠單抗 B细胞淋巴瘤因子2Oligo(dT)再生溶液Oligo (dT) RechargerCD97 抗體 (PE), 兔單抗 B细胞淋巴瘤因子6生物素标记的Oligo(dT)Biotinylated Oligo (dT)CD97 抗體 (FITC), 兔單抗 C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1链霉亲和素磁珠Magnetic beads,StreptavidinCLEC4A / CLECSF6 / DCIR 抗體 (FITC), 鼠單抗 Ca-ATP酶固相RNase清除剂Surface RNase ErasolCD97 抗體 (PE), 鼠單抗 cAMP反应元件结合蛋白固相RNase清除剂Surface RNase ErasolS100A9 抗體 (FITC), 鼠單抗 CC趋化因子受体1气相RNase清除剂Air RNase ErasolCD97 抗體 (FITC), 鼠單抗 Lactose TTC agarTTC乳糖琼脂250g MI MediumMI培养基1000ml Neutral Red-bile Salt Peptone Glucose Medium结晶紫中性红胆盐肉汤250g Coliform Medium(Japan)大肠菌群培养基(日本)250g 艾格LT100肉汤250g Nutrient Broth(Japan)营养肉汤(日本标准)250g SOC MediumSOC培养基250g Aliz-gal Broth茜素-β-半乳糖苷肉汤(Aliz-gal肉汤)100g Nutrient Agar(Agar 20g)营养琼脂(琼脂20g)250g Methyl Red Voges Proskauer Broth缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR-VP试验用培养基)250g DCLS Agar去氧胆酸盐枸橼酸盐乳糖蔗糖琼脂250g Honda Toxin-Producing BrothHonda氏产毒肉汤250g PSB(磷酸盐缓冲液pH7.2)9ml*20支/包 Modified Sclohtens' BrothModifiedSclohtens'Broth(MSB)250g Dextrose Broth葡萄糖肉汤250g the Smallest Broth Medium最小肉汤培养基250g HB-PET Auto-Indection MediumHB-PET自诱导培养基250g M-Endo Mediumm-远藤氏培养基250g CAYE MediumCAYE培养基250g Medium Ⅱ(for Transferring the Test Organism)接种测试微生物琼脂培养基250g Medium I(foe Seed and Basal Layer)菌种和底层琼脂培养基250g Inorganic Salt Medium无机盐培养基250g Sucrose Tryptone Broth蔗糖胰蛋白胨肉汤200 双料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)250g Disinfectant Neutralization Broth消毒液中和肉汤250g Lecithin polysorbate(LP)diluent卵磷脂吐温稀释液250g A-1 MediumA-1培养基250g M-Endo BrothM-Endo肉汤250g CCFA Agar BaseCCFA琼脂基础250g Double Lactose Bile Medium双料乳糖胆盐发酵培养基250g Mossel-Enterobacteriaceae Enrichment Broth肠道菌增菌肉汤250g MSA MediumMSA培养基250g Agar Medium F(Violet Red Bile Glucose Agar)琼脂培养基F(紫红胆盐葡萄糖琼脂)250g BIU87/ADR人膀胱癌阿霉素耐药株Enterobacteria Enrichment Broth-Mossel肠道菌富集肉汤培养基(USP)250g Gram Negative Bacteria Enrichment Broth革兰氏阴性菌增菌液250g Coliphage MS2 Liquid Medium大肠杆菌噬菌体MS2液体培养基250g Coliphage MS2 Medium(Semisolid)大肠杆菌噬菌体MS2半固体培养基250g GAD MediumGAD培养基250g Enterobacter Cloacae Isolation Agar阴沟肠杆菌分离琼脂(ECIA)250g
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