半岛bd体育手机客户端 编号：IAC322

原理

叶酸免疫亲和柱能够特异性的纯化样品中的叶酸，将样品与提取液混合、提取、过滤，然后将滤液通过免疫亲和柱。此时，叶酸物质键合在亲和柱中的抗体上。用蒸馏水将免疫亲合柱上的杂质除去。用洗脱液通过分离柱，将叶酸从抗体上分离下来。后，将洗脱液注入HPLC或LC-MS进行测定。

储存条件

该亲和柱保存在2-8 °C条件下，不能冷冻，保质期为18个月。建议在室温（18-30°C）下使用。

实验溶液制备

      pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl  加990mL纯水溶解，加纯水至1升。

    10%抗坏血酸钠：称取10g L-抗坏血酸钠100mL容量瓶中，加水溶解混匀。

     洗脱液（30%乙腈+0.2%三fu YI 酸）: 准确量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中，然后再加入0.2mL 三fu YI 酸，后用纯水定容至100mL。

所需其他试剂：胰酶（sigma P1750）

液相色谱条件

色谱柱： Agilent-C18,4.6×150mm（5um）

流动相：0.1%三fu YI 酸：乙腈=85:15（v/v）

流速：0.5 mL/min

检测器：紫外检测器，280nm

进样体积：50uL

科乐福叶酸免疫亲和柱

分析步骤

1） 样品提取及稀释：

婴儿配方食品、婴儿即食食品、牛奶、奶粉、谷物、能量棒等样品的操作步骤：称取 1-10g样品（根据需要的检测范围确定称量多少），置于250 mL锥形瓶中。将50mL pH7.4 PBS溶液加入到锥形瓶中，混匀。加入4g 胰酶，摇床震荡10分钟。加入6mL 10%抗坏血酸钠，摇床震荡5分钟。将锥形瓶置于37℃的水浴摇床震荡2 h。然后将锥形瓶置于100℃的水浴中静置20min。取出锥形瓶冷却至室温；用pH7.4 PBS溶液定容至100mL，摇匀。将提取液4000 RPM离心10 min。准确移取吸取上层液10 mL，备用。

2） 样品的净化

  叶酸免疫亲和柱的柱容量(吸附叶酸)为450ng，当样品中叶酸超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。

食品中folic acid 叶酸免疫亲和柱 IAC-SEP