半岛bd体育手机客户端 介绍
半岛bd体育手机客户端 及特点 田鼠痘病毒(Volepox Virus)会引起鼠痘,该病多呈爆发性流行,致死率较高,常造成小鼠全群淘汰,危害极大。临床表现以四肢、尾和头部肿胀、溃烂、坏死甚至脚趾脱落为特征。本病毒的自然宿主为小鼠,不同品系小鼠的易感性差异很大。本病常感染野生小鼠,使野生小鼠成为另一种危险的传染源,因此田鼠痘病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用,为此本公司开发了简单快捷的田鼠痘病毒染料法荧光定量PCR检测试剂盒,它具有下列特点: 1、即开即用,用户只需要提供病毒样品。 2、根据田鼠痘病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。 3、灵敏度可以达到几百拷贝/反应。 4、一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。 5、本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。 6、本半岛bd体育手机客户端 只适用于科研,不能用于临床诊断。 规格及成分
运输及保存 低温运输、-20℃保存,有效期一年。 自备试剂 DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。 使用方法 一、稀释PCR阳性对照(以102-107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例) 1、注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加半岛bd体育手机客户端 稳定性和避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。 2、标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。 3、用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液(**用带芯枪头,下同)。 4、在7号管中加入5 μL 1×108拷贝/μL的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 5、换枪头,在6号管中加入5 μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 6、换枪头,在5号管中加入5 μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。 7、重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。 二、样品DNA的制备 8、如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×104拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。 9、用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNAout或其升级版柱式病毒DNAout。本试剂盒免费赠送15次一管式病毒DNAout。 三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行) 10、如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。 11、在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加):
注:仅ABI7500、7700和7900半岛游戏平台官网入口网址 需要使用ROX作为对照,其他荧光PCR半岛游戏平台官网入口网址 (如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX,则用水替代。 12、盖上盖子后上机,按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据半岛游戏平台官网入口网址 不同而自行优化)。
13、数据采集 具体操作按所用半岛游戏平台官网入口网址 推荐的流程进行。本半岛bd体育手机客户端 中所含的荧光染料在不结合DNA时,最大吸收光谱在471 nm,结合DNA时的最大吸收光谱在500 nm,最大发射光谱在530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。 四、数据处理 14、如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。 15、如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。 |
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