半岛bd体育手机客户端 介绍
半岛bd体育手机客户端 及特点 多瘤病毒是一类病毒，其自然宿主主要是哺乳动物和鸟类。已知有13种物种(现在是14种)会感染人类，而在人类中发现的其他多瘤病毒如SV40则较少。在大多数人群中，这些病毒中的大多数都很常见，通常没有症状。这些病毒可能在几乎所有成年人中终生持续存在。由人多瘤病毒感染引起的疾病在免疫功能低下的人群中最常见。该病毒会对人体健康有较大影响，因此多瘤病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。 本半岛bd体育手机客户端 就是以探针法荧光定量 PCR技术为基础开发的专门检测多瘤病毒的试剂盒，它具有下列特点： 1、即开即用，用户只需要提供样品 DNA模板。 2、引物和探针经过优化，灵敏性高。 3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。 4、特异性高，引物是根据多瘤病毒通用高度保守区设计。 5、本半岛bd体育手机客户端 足够 50次 20μL体系的探针法荧光定量 PCR反应。 6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。 规格及成分
运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为 12个月。 自备试剂 样品 DNA。 使用方法 一、稀释PCR阳性对照(以10E1-106拷贝/μL这6个10倍稀释度为例) 如果做定性实验，则此步可以跳过。如果做定量实验，则需要稀释阳性对照做标准曲线。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。本半岛bd体育手机客户端 只提供 DNA片段作为阳性对照。 1.标记 6个离心管，分别为 6，5，4，3，2，1。 2、用带芯枪头分别加入 45μL荧光 PCR专用模板稀释液(**用带芯枪头，下同)。 3、在 6号管中加入 5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡 1分钟，得 1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 4、换枪头，在 5号管中加入 5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得 1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 5、换枪头，在 4号管中加入 5μL 1×105拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1分钟，得 1×104拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 6、重复上面的操作直到得到 6个稀释度的标准曲线样品。放冰上用。 二、样品 DNA的制备 7、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是样品制备 PC(样品制备阳性对照)，一个是样品制备 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为样品制备 PC。另外用水作为样品制备 NC。 8、用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数 DNA提取试剂盒兼容。 三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行) 9、如果做定量分析并且只做1次重复，则标记 N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于 PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记 N+4个 PCR管，其中 N+2个用于上步得到的 N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于 PCR阳性对照(用第4号管中的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为描述操作步骤， 10、在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
11、盖上盖子后上机，按下面参数进行 PCR：
四、数据处理 12、如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log值为横轴，以 Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct值从标准曲线上推算出样品 DNA浓度的 log值，再推算出其浓度。 13、如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于 35。对待测样品，如果其 Ct大于或等于 40则为阴性，如果小于或等于 35则为阳性。如果在 35-40之间，则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40则为阴性，如果小于 40，则为阳性。 |
相关半岛bd体育手机客户端
|
