半岛bd体育手机客户端 介绍
半岛bd体育手机客户端 及特点 班氏丝虫(Wuchereria bancrofti ),盘尾科吴策线虫属的一种丝虫。是世界卫生组织公布的十大热带病之一淋巴丝虫病的病原。成虫寿命 4~10年,微丝蚴的寿命一般为 2-3个月,最多可活 2年以上,在体外 4℃条件下可活 6周。成虫寄生在淋巴管内本半岛bd体育手机客户端 就是根据PCR原理开发的专门检测班氏丝虫的试剂盒,它具有下列特点: 1、即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。 2、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。 3、半岛bd体育手机客户端 精心优化且特异性高,引物是根据班氏丝虫DNA高度保守区设计,不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。 4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。 5、本半岛bd体育手机客户端 足够50次20μL体系的PCR反应。 6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于定性实验,不能用于定量。 7、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。 规格及成分
注:为避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的核酸片段作为阳性对照。 运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为12个月。 自备试剂 样品DNA 使用方法 一、样品DNA的制备 1、如果有N个样品,必须设置N+2个提取反应,多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL班氏丝虫PCR阳性对照(1×106拷贝/μL,本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。 2、用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌DNA提取试剂盒兼容。 二、设置PCR反应(20μL体系) 3、标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的DNA样品,额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照,另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分:
4、上机进行PCR,PCR反应参数为:
三、电泳分析 5、取5-10uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。 6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为200bp左右。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。 7、如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂、设备、程序、操作等),需要重复并排查原因。 8、如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中有扩增产物的判定为阳性,无则判定为阴性。 |
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