半岛bd体育手机客户端 及特点

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)是一种 RNA病毒，属副粘液病毒科。该病经空气飞沫和密切接触传播。多见于新生儿和 6个月以内的婴儿。婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。少数病儿可并发中耳发炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年长儿童感染后，主要表现为上呼吸道感染，因此呼吸道合胞病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发的呼吸道合胞病毒检测的试剂盒。它具有下列特点：

1、一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2、根据呼吸道合胞病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3、灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

4、使用一管式 RT-PCR技术，RT和 PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够 50次 20μL体系的 RT-PCR。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	91202a	200 μL(橘黄盖)
MMLV-Taq Mix	91202b	75 μL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄盖)
呼吸道合胞病毒 RT-PCR引物混合液	13-13700yw	100 μL(白盖)
呼吸道合胞病毒 RT-PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-13700pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-13700sc	1份

注：为避免扩散传染性病原，本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样品 RNA的制备1、如果有 N个样品，必须设置 N+2个提取，多出的一个是 PC(样品制备阳性对照)，一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL呼吸道合胞病毒 RT-PCR阳性对照的 1000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制

备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

二、设置 RT-PCR反应(20μL体系)

3、如果有 N+2个样品，则标记 N+4个 PCR管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR阳性对照，另一个是 RT-PCR阴性对照)并按照下表在 PCR管中加入下列成分：

成份	N+2个样品管	RT-PCR阴性对照	RT-PCR阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
呼吸道合胞病毒 RT-PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个制备的 RNA样品	各 12.5 μL	-	-
超纯水	-	12.5 μL	-
呼吸道合胞病毒 RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液	-	-	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4、上机进行 RT-PCR，RT-PCR反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30 min
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	55℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

5、琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期的条带出现，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。