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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
斑点叉尾鮰病毒PCR试剂盒
斑点叉尾鮰病毒PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Channel Catfish Virus(CCV) PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

斑点叉尾鮰病毒(Channel Catfish Virus,CCV)是鮰疱疹病毒Ⅰ型,属疱疹病毒科,呈二十面体,有囊膜,直径 175~200nm,病毒核酸为双链 DNA。该病毒引起斑点叉尾鮰病毒病,主要感染斑点叉尾鮰的鱼苗和鱼种,成鱼也可发生隐性感染称为带毒者。目前已成为危害世界各国鮰养殖的最主要传染病之一。我国近年已在斑点叉尾鮰鱼苗中分离到 CCV。由于该病毒主要感染斑点叉尾鮰和其他鮰的鱼苗和幼鱼,有很高死亡率,刚孵化鱼苗死亡率可达 100%,因此快速灵敏检测斑点叉尾鮰病毒具有重要意义。为此本公司开发了斑点叉尾鮰病毒的 PCR检测试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增斑点叉尾鮰病毒,与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、 PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次,但只能用于科研。

规格及成分

成份 编号 十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL(红盖)
超纯水 100935 1 mL(亮黄色)
斑点叉尾鮰病毒 PCR引物混合液 13-51200yw 100 μL(白盖)
斑点叉尾鮰病毒 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) 13-51200pc 50 μL(黄盖)
使用手册 13-51200sc 1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。

2、如果有 N个样品,则需要做 N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL斑点叉尾鮰病毒 PCR阳性对照的 1000倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放

冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分

N+2个样品管 PCR阴性对照 PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
斑点叉尾鮰病毒 PCR引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2个样品 DNA模板 各 18 μL - -
PCR阴性对照(水) - 18 μL -
PCR阳性对照(斑点叉尾鮰病毒 PCR阳性对照的1000倍稀释液) - - 18 μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程 温度 时间
预变性 95℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 95℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 55℃ 30 sec
PCR反应(35个循环) 72℃ 20 sec
最后延伸 72℃ 7 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有 136bp大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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