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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
犬冠状病毒RT-PCR试剂盒
犬冠状病毒RT-PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Canine Corona Virus(CCoV) RT-PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

犬冠状病毒(Canine coronavirus,CCV )为单链 RNA病毒,有 6~7种多肽,其中 4种是糖肽,不含 RNA聚合酶及神经氨酸酶。可使犬发生程度不同的胃肠炎症状,特征有频繁呕吐、腹泻、沉郁、厌食等症状。本病一年四季均可发生,以冬季多发,病犬是主要的传染原,犬可通过呼吸道、消化道、粪便及污染物传染。该病一但发生,同窝犬同室犬很难控制均可造成感染。幼犬死亡率较高,对幼犬的危害较大。最近的研究发现,CCV感染的宿主范围有不断扩大的趋势,许多野生动物如虎、狮、大熊猫、小熊猫、水紹也可感染。所以对犬呼吸道病毒的快速准确检测与鉴定具有重要的临床意义。本半岛bd体育手机客户端 根据 RT-PCR原理开发,它具有下列特点:

1、使用一管式 RT-PCR试剂盒,减少了操作步骤,降低了操作误差。

2、灵敏度高于过去使用的 ELISA方法,能达到至少 1000拷贝/反应。

3、简单快速,用户不需单独准备每种试剂。

4、针对犬冠状病毒 M保守区设计,检测的特异性强。

5、用于 CCV的定性鉴定检测和分子流行病学调查。

规格及成分

成分 编号 十孔盒包装
双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 91202A 750 uL
MMLV-Taq Mix 91202B 100 uL
CCV专一性引物对 yw14191420 100 uL
CCV阳性对照(108拷贝/uL) Yw14211422 50 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 11-2130sc 1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限一年。

自备试剂

一管式病毒 RNAout或柱式病毒 RNAout

使用方法

一、样品 RNA的制备用自选方法纯化可能含 CCV样品的 RNA,也可以另购本公司的一管式病毒RNAout或柱式病毒 RNAout,上述两款半岛bd体育手机客户端 跟本试剂盒兼容。

二、阳性对照

1、为增加半岛bd体育手机客户端 稳定性和避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA片段作为阳性对照。

2、使用本阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。**在专门的区域操作。

三、设置 RT-PCR反应(30 uL体系)

3、在 PCR管中加入下列成分:

成份

样品 阳性对照 阴性对照
双酶一管式 RT-PCR Buffer,2× 15 uL 15 uL 15 uL
CCV专一性引物对 2 uL 2 uL 2 uL
样品 RNA 1-5 uL
CCV阳性对照 2 uL
补超纯水到 28 uL 28 uL 28 uL
MMLV-Taq Mix 2 uL 2 uL 2 uL

4、轻柔混匀后上机,按下面参数进行 RT-PCR。

过程 温度 时间
逆转录 60℃ 30分钟
预变性 94℃ 2分钟
PCR反应(30个循环) 94℃ 30 s
PCR反应(30个循环) 49℃ 30 s
PCR反应(30个循环) 72℃ 30 s
延伸 72℃ 5分钟

5、电泳检测 RT-PCR产物。预期的 PCR产物长度为 384bp。

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