半岛bd体育手机客户端 及特点

本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有开心果的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本半岛bd体育手机客户端 就是为满足这一需求根据 PCR原理开发的半岛bd体育手机客户端 ，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

2、根据开心果源性保守区域设计引物，能专一性地检测出样品中的开心果成分，但不能检测其他非开心果成分。

3、比 ELISA更加灵敏。对混合样品中开心果成分的检测下限为 0.1%，对样品中开心果成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL。

4、快速，整个检测过程(按一个样品计)需 2.0小时左右。

5、提供阳性标准品，便于分析实验结果。

6、本只能用于科研，足够 50次 40μL体系的常规 PCR。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄盖)
开心果源性成分 PCR引物混合液	13-144yw	100 μL(白盖)
开心果源性成分 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)	60908-144pc	50 μL(黄盖)
使用手册	13-144sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。开心果源性成分 PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备1、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数动植物DNA提取试剂盒兼容。

2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在跟试剂盒所要求的样品体积相当的水中(如果试剂盒一次处理需要 200μL样品，则此处使用 200μL水)，加 10μL开心果源性成分 PCR阳性对照的 1000倍稀释液(需要提前将阳性对照稀释 1000倍)而得，样品制备阴性对照是直接用所需量的

水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
开心果源性成分 PCR引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品 DNA模板	各 18 μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18 μL	-
PCR阳性对照(开心果源性成分 PCR阳性对照的1000倍稀释液)	-	-	18 μL

4、按下表设置 PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应(35个循环)	95℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	60℃	30 sec
PCR反应(35个循环)	72℃	20 sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有 91bp大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。