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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
支原体通用PCR试剂盒
支原体通用PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Mycoplasma spp. PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

支原体和亲缘关系很近的无胆甾原体等统称霉形体。霉形体是目前发现的最小的、最简单的原核生物。它们缺乏细胞壁、有变形能力、能通过滤菌器、可在无生命培养基中生长繁殖,成为细胞培养中常见的一种污染源,严重影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。因此,对以支原体为主的霉形体进行早期检测非常重要,它能使得研究人员在污染扩散前快速采取有效措施,减低损失。本半岛bd体育手机客户端 就是根据 PCR原理开发的专门检测副溶血性弧菌的试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供样品 DNA模板。

2、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

3、半岛bd体育手机客户端 精心优化且特异性高,引物是根据支原体通用 DNA高度保守区设计,不会跟除此之外的其它微生物 DNA发生交叉反应。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够 50次 20μL体系的 PCR反应。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于定性实验,不能用于定量。

7、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份 编号 五孔盒包装
2×PCR MagicMix 3.0 90805 500μL(绿盖)
超纯水 100935 1 mL(白盖)
支原体通用 PCR引物混合液 13-7400yw 100 μL(红盖)
支原体通用 PCR阳性对照(1×106拷贝/μL) 7400pc 50 μL(黄盖)
使用手册 13-7400sc 1份

注:为避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的核酸片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12个月。

自备试剂

样品 DNA

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取反应,多出的两个中一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL支原体通用 PCR阳性对照(1×106拷贝/μL,本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

2、用自选方法纯化上述 N+2个样品的 DNA。本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA提取试剂盒兼容。

二、设置 PCR反应(20μL体系)

3、标记 N+4个 PCR管,其中 N+2个用于上步得到的 DNA样品,额外增加的两个管一个用于 PCR阳性对照,另一个用于 PCR阴性对照。按照下表在各 PCR管中加入下列成分:

成分/每管 样品管N+2个 PCR阴性对照 PCR阳性对照
2×PCR MagicMix 3.0 10 μL 10 μL 10 μL
支原体通用 PCR引物混合液 2 μL 2 μL 2 μL
制备的 N+2个 DNA样品 8 μL - -
超纯水 - 8 μL -
支原体通用 PCR阳性对照的 10倍稀释液 - - 8 μL

4、上机进行 PCR,PCR反应参数为:

过程 温度 时间
预变性 95℃ 10 min
PCR反应(40个循环) 95℃ 15 sec
PCR反应(40个循环) 58℃ 30 sec
PCR反应(40个循环) 72℃ 60 sec
延伸 72℃ 10 min

三、电泳分析

5、取 5-10uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用 1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为 200bp左右。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或 PCR阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。

7、如果所有样品和 PCR阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂、设备、程序、操作等),需要重复并排查原因。

8、如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中有扩增产物的判定为阳性,无则判定为阴性。

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