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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
白色念珠菌PCR试剂盒
白色念珠菌PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名:Candida albicans PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

白色念珠菌(Canidia albicans)又叫白假丝酵母菌是一种真菌,通常存在于正常人口腔,上呼吸道,肠道及阴道,一般在正常机体中数量少,不引起疾病,当机体免疫功能或一般防御力下降或正常菌群相互制约作用失调,则本菌大量繁殖并改变生长形式(芽生菌丝相)侵入细胞引起疾病。其中包括皮肤念珠菌病(好发于皮肤皱褶处,皮肤潮红、潮湿、发亮,有时盖上一层白色或呈破裂状物,病变周围有小水泡)、粘膜念珠菌病(以鹅口疮、口角炎、阴道发炎最多见)、内脏及中枢神经念珠菌病(可由粘膜皮肤等处病菌播散引起,有肺炎、肠胃炎、心内膜炎、脑膜炎、脑炎等,偶尔也可发生败血症)。因此快速灵敏检测梭状芽孢杆菌具有重要的意义,本试剂盒就是为此目的根据 PCR原理开发,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供细菌 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增白色念珠菌 DNA。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0908051 mL(红盖)
超纯水1009351 mL(亮黄盖)
白色念珠菌 PCR引物混合液13-60210yw100  μL(白盖)
白色念珠菌 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)13-60210pc50  μL(黄盖)
核酸释放剂试用装6120220次(1mL、绿盖)
使用手册13-60210sc1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的 100倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数细菌 DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的细菌 DNAout或柱式细菌 DNAout。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂,本半岛bd体育手机客户端 的裂解液可以直接作为 PCR模板,省略了DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40  μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分

N+2个样品管PCR阴性对照PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0各 20 μL20 μL20 μL
白色念珠菌 PCR引物混合液各 2  μL2  μL2  μL
N+2个样品 DNA模板各 18  μL--
样品制备阴性对照(超纯水)-18  μL-
样品制备阳性对照(白色念珠菌阳性对照的 10000倍稀释液)--18  μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃15 sec
PCR反应(35个循环)58℃15 sec
PCR反应(35个循环)72℃60 sec
最后延伸72℃10 min

三、电泳检测

5、取 10-20  μL  PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR  Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 263bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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