半岛bd体育手机客户端 及特点

牛细小病毒(Bovine Parvovirus,BPV)会引发牛细小病毒感染，是一种接触性传染病,以下痢为主要症状,其特征是母牛生殖机能障碍，导致妊娠母牛感染导致流产、死胎，犊牛感染则表现肠炎、腹泻。牛细小病毒感染在牛群中发生比较广泛，目前国内外对其研究的较少,发生此病的国家也不多，因此检测牛细小病毒DNA具有重要意义。本半岛bd体育手机客户端 具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供病毒DNA模板。

2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增牛细小病毒，与其他病毒没有交叉反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1 mL(红盖)
超纯水	100935	1 mL(亮黄盖)
牛细小病毒PCR引物混合液	13-44000yw	100μL(白盖)
牛细小病毒PCR阳性对照 (1×108拷贝/μL)	60908-44000pc	50μL(黄盖)
使用手册	13-44000sc	1份

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。牛细小病毒PCR阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。

自备试剂

样品DNA。

使用方法

一、样品DNA的制备

1、用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。

2、如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在200μL水中加10μL牛细小病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用200μL水。提取结束后最后得到200μL模板DNA(每个样品)放冰上待用，溶解DNA沉淀的溶液不能少于200μL，否则PCR抑制物很可能会抑制PCR。

二、设置PCR反应(40μL体系)

3、对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成分	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各20μL	20μL	20μL
牛细小病毒PCR引物混合液	各2 μL	2 μL	2 μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	-	-
PCR阴性对照(水)	-	18μL	-
PCR阳性对照(牛细小病毒PCR阳性对照的10000倍稀释液)	-	-	18μL

4、按下表设置PCR反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应 (35个循环)	95℃	45sec
	54℃	45sec
	72℃	30sec
最后延伸	72℃	10 min

三、电泳检测

5、取10-20μL PCR产物。电泳检测PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加loading buffer。预期的PCR产物长度为319bp。阳性对照必须有此条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释10倍后重复PCR扩增以排除PCR抑制剂的感染。