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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
百日咳波氏杆菌PCR试剂盒
百日咳波氏杆菌PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Bordetella pertussis PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

百日咳是一种由百日咳波氏杆菌引起的急性呼吸道传染病。百日咳波氏杆菌是革兰阴性杆菌,可产生一些致病物质,包括百日咳毒素、气管细胞毒素、腺苷酸环化酶毒素、不耐热毒素以及内毒素等。百日咳毒素可使患者淋巴组织中的淋巴细胞动员到周围血液及气管,细胞毒素可特异性损伤气管纤毛上皮细胞,使之变性、坏死。百日咳的临床特征为咳嗽逐渐加重,呈典型的阵发性、痉挛性咳嗽,咳嗽终末出现深长的鸡啼样吸气性吼声,病程长达 2-3个月,故有百日咳之称。本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发检测百日咳波氏杆菌的试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增百日咳波氏杆菌,与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次,但只能用于科研。

规格及成分

成份 编号 十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL(红盖)
超纯水 100935 1 mL(亮黄色)
百日咳波氏杆菌 PCR引物混合液 13-12240yw 100 μL(白盖)
百日咳波氏杆菌 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) 60908-12240pc 50 μL(黄盖)
使用手册 13-12240sc 1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式细菌 DNAout。

2、如果有 N个样品,则需要做 N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL百日咳波氏杆菌 PCR阳性对照的 1000倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分 N+2个样品管 PCR阴性对照 PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL
百日咳波氏杆菌 PCR引物混合液 各 2 μL 2 μL 2 μL
N+2个样品 DNA模板 各 18 μL - -
PCR阴性对照(水) - 18 μL -
PCR阳性对照(百日咳波氏杆菌 PCR阳性对照的1000倍稀释液) - - 18 μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程 温度 时间
预变性 95℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 95℃ 15 sec
PCR反应(35个循环) 57℃ 15 sec
PCR反应(35个循环) 72℃ 40 sec
最后延伸 72℃ 10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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