半岛bd体育手机客户端 及特点

大麦条纹花叶病毒(Barley Stripe Mosaic Virus，BSMV)病毒粒体棒状，含三种基因组RNA，有几种株系还含有分子量280000的亚基因组RNA。它可以在所有植物组织中繁殖。在叶肉细胞和表皮细胞的细胞质中，叶绿体表面和细胞核中均有发现。BSMV能进入种子和花粉中，还会侵染到胚珠中，随着世界性种质资源的流通传遍各大洲，一度严重影响世界大麦的产量。BSMV病毒危害大麦、小麦、玉米、植物症状表现因毒株、寄主品种和环境因素而不同。不同株系在叶面产生细线条至纵向条纹症状，不同寄主植物上分别产生淡绿色条纹、褪绿、坏死等。被害种子小而皱缩，长出植株严重矮化。因此灵敏快捷地检测大麦条纹花叶病毒具有重要的意义。本半岛bd体育手机客户端 就是为满足此需求而开发的、专门检测大麦条纹花叶病毒的RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2、半岛bd体育手机客户端 经过精心优化，分析灵敏性能到达 100拷贝/反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、特异性高，引物是根据大麦条纹花叶病毒RNA高度保守区设计，只能检测大麦条纹花叶病毒，不会跟除此之外的其他病毒的RNA发生交叉反应。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够50次20μL体系的RT-PCR反应。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于定性实验，不能用于定量。

7、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	五孔盒包装
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	91202a	200μL(橘黄盖)
MMLV-Taq Mix	91202b	75μL(红盖)
超纯水	100935	1mL(紫盖)
大麦条纹花叶病毒RT-PCR引物混合液	yw13-1320	100μL(白盖)
大麦条纹花叶病毒RT-PCR阳性对照 (1×107拷贝/μL)	pc1320-KY615797	50μL(黄盖)
使用手册	13-1320sc	1份

注：为避免扩散传染性病原，本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂

样品RNA

使用方法

一、样品RNA的制备

1、如果有N个病毒样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL大麦条纹花叶病毒RT-PCR阳性对照(1×10⁷拷贝/μL，本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

2、用自选方法纯化上述N+2个样品的RNA。本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置RT-PCR反应(20μL体系)

3、标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的RNA样品，额外增加的两个管一个用于RT-PCR阳性对照，另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：

成份	N+2个 样品管	RT-PCR阴性对照	RT-PCR阳性对照
5×双酶一管式RT-PCR Buffer	各4μL	4μL	4μL
大麦条纹花叶病毒RT-PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
制备的N+2个RNA样品	各12.5μL	不加	不加
超纯水	不加	12.5μL	不加
大麦条纹花叶病毒RT-PCR阳性对照的10倍稀释液	不加	不加	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5μL	1.5μL	1.5μL

4、上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为:

过程	温度	时间
逆转录	42℃	55分钟
预变性	95℃	5分钟
PCR反应(45个循环)	95℃	15秒
	55℃	15秒
	65℃	30秒
延伸	72℃	10分钟

三、电泳分析

5、取10-20uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为150bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或RT-PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。

7、如果所有样品和RT-PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。

8、如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。