半岛bd体育手机客户端 介绍
半岛bd体育手机客户端 及特点 蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus),又称仙人掌杆菌,是一种革兰氏阳性菌,β溶血性的杆状细菌。经常在土壤和食物中被发现,有些菌株会引起食物中毒;另外一些菌株则对其他动物有益。蜡样芽孢杆菌是兼性厌氧性。与其他芽孢杆菌相同,它会产生防御性的内芽孢。它的致病因子包括施普善和磷脂酶 C。荧光定量 PCR是检测传染性疾病的主流技术,本半岛bd体育手机客户端 就是以染料法荧光定量 PCR技术为基础开发的专门检测蜡样芽胞杆菌的试剂盒,它具有下列特点: 1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。 2、特异性高,引物根据蜡样芽胞杆菌高度保守区设计,不会扩增其他细菌。 3、引物和扩增体系经过优化,灵敏性比常规 PCR高 100倍。 4、提供无传染性的 PCR阳性对照,便于区分假阴性样品。 5、一管式操作,荧光 PCR检测,不容易产生环境污染。 6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研,本试剂盒足够 50次 20μL体系的 PCR。 规格及成分
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12个月。 自备试剂 样品 DNA。 使用方法 一、制备标准曲线样品(以 102-107拷贝/μL这 6个 10倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加半岛bd体育手机客户端 稳定性和避免扩散传染性病原,本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA片段作为阳性对照。 1、标记 6个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。 2、用带芯枪头分别加入 45 μL荧光 PCR专用模板稀释液,**用带芯枪头,下同)。 3、在 7号管中加入 5 μL阳性对照(其浓度为 1×108拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1分钟,得 1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 4、换枪头,在 6号管中加入 5 μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1分钟,得 1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 5、换枪头,在 5号管中加入 5 μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1分钟,得 1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。 6、重复上面的操作直到得到 6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 二、样品 DNA的制备 7、用自选方法纯化样品的 DNA,本半岛bd体育手机客户端 跟市场上绝大多数核酸纯化半岛bd体育手机客户端 兼容。 8、如果有 N个样品,则需要进行 N+2个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂试用装,该释放剂的裂解液可以直接作为 PCR模板,省略了 DNA提取步骤。 三、设置 qPCR反应(20μL体系,在样品制备室进行) 9、如果进行定量分析,则标记 N+9个 PCR管,其中 N+2个用于上步得到的 N+2个样品,1个用于 PCR阴性对照,6个用于标准曲线样品。如果做定性分析,则 6个标准曲线样品只选一个做(可以选 4号,其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。 10、在标记管中按下表加入各成分:
注:仅 ABI7500、7700和 7900半岛游戏平台官网入口网址 需要使用 ROX作为对照,其他荧光 PCR半岛游戏平台官网入口网址 (如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、 RotorGene 3000 、 RotorGene 6000和 LightCycler480 )不需要使用 ROX,则用水替代。 11、盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR参数可以根据半岛游戏平台官网入口网址 不同而自行优化)。 四、荧光定量 PCR反应参数
五、数据处理 12、设定 60℃-96℃范围的熔解曲线分析,排除假阳性。 13、如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的 log值为横轴,以 Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct值从标准曲线上推算出样品 DNA浓度的 log值,再推算出其浓度。 14、如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性,则阴性对照 Ct必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于 30。对待测样品,如果其 Ct大于或等于 40则为阴性,如果小于或等于 35则为阳性。如果在 35-40之间,则重复一次。重复实验的 Ct值如果大于或等于 40则为阴性,如果小于 40,则为阳性。 |
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