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禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒
禽网状内皮组织增殖病病毒RT-PCR试剂盒图片
包装: 50次
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半岛bd体育手机客户端 别名: Avian Reticuloendotheliosis Virus(REV) RT-PCR Kit
半岛bd体育手机客户端 介绍

半岛bd体育手机客户端 及特点

网状内皮增殖病是由网状内皮组织增殖症病毒(Reticuloendotheliosis Virus,REV)引起的一种肿瘤性传染病,病鸡表现为贫血、消瘦,生长缓慢等。病理解剖特点是肝脏、肠道、心脏和其它器官有淋巴瘤,胸腺和法氏囊萎缩,腺胃炎。本病能侵害机体的免疫系统,可导致机体免疫机能下降或继发其它疾病。本半岛bd体育手机客户端 就是专门用于 REV的 RT-PCR检测的试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供病毒 RNA模板。

2、提供阳性对照,便于在遇到问题时分析原因。

3、引物根据 REV病毒保守的 LTR序列设计,不与其他病毒发生交叉反应。

4、使用两步式 RT-PCR,先做 RT再做 PCR,操作更加灵活。

5、本试剂盒灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

6、本试剂盒足够 50次 20 μL体系的 RT反应,50次 40 μL体系的 PCR反应。

7、本半岛bd体育手机客户端 只用于科研

规格及成分

成份 编号 十孔盒包装
MMLV(含 RI) 60906a 50 μL(黄盖)
RT Buffer(含 dNTP) 60906b 250 μL(白盖)
超纯水 100935 1 mL(本色盖)
PCR MagicMix 3.0(含染料) 90805 1 mL(红盖)
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR引物混合液 13-26500yw 100 μL(白盖)
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR阳性对照 13-26500pc 50 μL(黄盖)
RNA病毒裂解液(试用装) 3073a 15次(10mL)
使用手册 13-26500sc 1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为 12个月。收到试剂盒后**请将阳性对照放置到专门区域,因为其含有较高浓度的扩增产物,容易污染其他试剂。

自备试剂

样品 RNA。

使用方法

一、样品 RNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL试剂盒提供的阳性对照再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。使用本阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。必须在专门的区域操作。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 15次 RNA病毒裂解液试用装(一管式病毒 RNAout的成分)。

二:设置 RT反应

3、如果有 N+2次 RNA提取,则按照下表设置 N+2个 RT反应体系(20 μL体系):

成份

用量
RNA模板(自备) 1-10 μL即可
网状内皮组织增殖症病毒 RT-PCR引物混合液 2 μL
超纯水 补水到 14 μL
RT Buffer(含 dNTP) 5 μL
MMLV(含 RI) 1 μL

4、42℃保温 60 min,70℃保温 10 min以终止反应,然后放置在冰上待用。此为 cDNA样品。三、设置 PCR反应

5、对 N+2个 cDNA样品,则在 N+4个 PCR管中加入下列成分(多的一个是 PCR阴性对照,一个是 PCR阴性对照):

成分 N+2个样品 PCR阴性对照 PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0 20 μL 20 μL 20 μL
网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR引物混合物 2 μL 2 μL 2 μL
N+2个 cDNA样品 5 μL 不加 不加
网状内皮组织增殖症病毒RT-PCR阳性对照 不加 不加 1 μL
补超纯水到 40 μL 40 μL 40 μL

6、上机进行 PCR,PCR反应参数为:

过程 温度 时间
逆转录 42℃ 60 min
预变性 94℃ 5 min
PCR反应(35个循环) 94℃ 0.5 min
PCR反应(35个循环) 55℃ 0.5 min
PCR反应(35个循环) 72℃ 0.5 min
最后延伸 72℃ 10 min

7、取 10uL PCR产物直接在 1%琼脂糖凝胶上电泳,正确的扩增产物的大小为 220 bp。阳性对照必须出现 220bp的 PCR产物,否则 RT-PCR体系有问题,需要寻找原因。如果阴性对照出现 220bp的 PCR产物,则说明试剂或环境中有过去 PCR产物的污染,需要把样品制备和 PCR反应后电泳充分隔离进行。如果发生了污染,则需要另外设计引物,本试剂盒提供的引物和阳性对照将不可用。

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