半岛bd体育手机客户端 及特点

小麦叶疫病菌学名为Alternaria triticina Prasada&Prabhu，英文名为leaf blight of wheat，它可以导致叶片病变坏死。小麦叶疫病在许多国家都是重要的检疫性病害，因此灵敏快捷地检测小麦叶疫病菌具有重要的意义。本半岛bd体育手机客户端 就是为满足此需求而开发的、专门检测小麦叶疫病菌的PCR试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2、半岛bd体育手机客户端 经过精心优化，分析灵敏性能到达 100拷贝/反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、特异性高，引物是根据小麦叶疫病菌DNA高度保守区设计，只能检测小麦叶疫病菌，不会跟除此之外的其他病菌的DNA发生交叉反应。

5、本半岛bd体育手机客户端 足够50次20μL体系的PCR反应。

6、本半岛bd体育手机客户端 只能用于定性实验，不能用于定量。

7、本半岛bd体育手机客户端 只能用于科研。

规格及成分

成份	编号	五孔盒包装
PCR MagicMix 3.0	90805	1mL(红盖)
超纯水	100935	1mL(紫盖)
小麦叶疫病菌PCR引物混合液	yw13-1100	100μL(白盖)
小麦叶疫病菌PCR阳性对照(1×107拷贝/μL)	pc1100-AY154695	50μL(黄盖)
使用手册	13-1100sc	1份

注：为避免扩散传染性病原，本半岛bd体育手机客户端 不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂

样品DNA

使用方法

一、样品DNA的制备

1、如果有N个病菌样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL小麦叶疫病菌PCR阳性对照(1×10⁷拷贝/μL，本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

2、用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数病菌DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置PCR反应(20μL体系)

3、标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：

成份	N+2个 样品管	PCR阴性对照	PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0	各10μL	10μL	10μL
小麦叶疫病菌PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
制备的N+2个DNA样品	各8μL	不加	不加
超纯水	不加	8μL	不加
小麦叶疫病菌PCR阳性对照 的10倍稀释液	不加	不加	8μL

4、上机进行PCR，PCR反应参数为:

过程	温度	时间
预变性	95℃	5分钟
PCR反应(35个循环)	95℃	20秒
	55℃	20秒
	72℃	40秒
延伸	72℃	10分钟

三、电泳分析

5、取10-20uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为520bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。

7、如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。

8、如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。