半岛bd体育手机客户端 及特点
莱氏无胆甾原体属于柔膜体纲，支原体目，无胆甾原体科，无胆甾原体属。莱氏无胆甾原体最初分离自污水、肥料、腐土质、土壤和植物组织，后来人们发现在牛生殖道和鼻腔、猪鼻腔、人口腔、鸡窦等各种哺乳动物和鸟类中均发现其寄生现象。莱氏无胆甾原体也是常见的污染细胞的支原体之一。本半岛bd体育手机客户端 是根据 PCR原理开发的莱氏无胆甾原体检测试剂盒，它具有下列特点：
1、即开即用，用户只需要提供 DNA模板。
2、引物经过精心优化，专一性强，只扩增莱氏无胆甾原体。
3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4、PCR mix中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次，但只能用于科研。
规格及成分
| 成份 |
编号 |
十孔盒包装 |
| PCR Magic Mix 3.0 |
90805 |
1 mL(红盖) |
| 超纯水 |
100935 |
1 mL(亮黄色) |
| 莱氏无胆甾原体 PCR引物混合液 |
13-75400yw |
100 μL(白盖) |
| 莱氏无胆甾原体 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) |
60908-75400pc |
50 μL(黄盖) |
| 使用手册 |
13-75400sc |
1份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂
样品 DNA。
使用方法
一、样品 DNA的制备
1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2、如果有 N个样品，则需要做 N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL莱氏无胆甾原体 PCR阳性对照的 10000倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。
二、设置 PCR反应(40μL体系)
3、对 N+2个样品，在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照，故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分：
| 成分 |
N+2个样品管 |
PCR阴性对照 |
PCR阳性对照 |
| PCR Magic Mix 3.0 |
各 20 μL |
20 μL |
20 μL |
| 莱氏无胆甾原体 PCR引物混合液 |
各 2 μL |
2 μL |
2 μL |
| N+2个样品 DNA模板 |
各 18 μL |
不加 |
不加 |
| PCR阴性对照(水) |
不加 |
18 μL |
不加 |
| PCR阳性对照(莱氏无胆甾原体 PCR阳性对照的10000倍稀释液) |
不加 |
不加 |
18 μL |
4、按下表设置 PCR反应：
| 过程 |
温度 |
时间 |
| 预变性 |
95℃ |
5 min |
| PCR反应(35个循环) |
95℃ |
30 sec |
| PCR反应(35个循环) |
55℃ |
30 sec |
| PCR反应(35个循环) |
72℃ |
30 sec |
| 最后延伸 |
72℃ |
10 min |
三、电泳检测
5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本半岛bd体育手机客户端 提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。
