• Nt.CviPII 可用于NicE-Seq 技术进行高分辨率开放染色质分析。如需了解更多信息，请参阅常见问题和操作步骤（下方）。
• 这是一种切刻内切酶，产生的DNA 分子是“切刻”的，而不是切断的
• 酶切位点：(0/-1)CCD

Nt.CviPII 是一种切刻内切酶，仅切割双链 DNA 底物上的一条链。酶切 pUC19 的终产物是一系列 25 到 200 bp 的片段。酶切 CCT 的效率低于 CCG 和 CCA。某些 CCT 位点没有被切割。（根据 NEB 的实验观察。）

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克隆自小球藻病毒（ Chlorellavirus） NYs-1 的截短型 Nt.CviPII 切刻内切酶基因，与 Mxe GyrA 内含肽、几丁质结合域在大肠杆菌中融合表达。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g pUC19 DNA 产生大小在 25 至 200 bp 之间稳定分布的片段所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 10%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 25%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  20 mM Tris-HCl
  100 mM NaCl
  50% Glycerol
  pH 8 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 阻断酶切

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  单独销售的组分

  • rCutSmart? 缓冲液

• 注意事项
  1. 实验证明该酶还具有核酸外切酶活性。因此在大多数反应中建议**反应时间为 1 小时。凝胶电泳检测时，建议上样缓冲液中 SDS 的终浓度为 0.4%。
  2. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  3. Nt.CviPII 是一种切刻内切酶，仅切割双链 DNA 底物上的一条链。酶切 pUC19 的终产物是一系列 25 到 200 bp 的片段。酶切 CCT 的效率低于 CCG 和 CCA。某些 CCT 位点没有被切割。（根据 NEB 的实验观察）
  4. CpG 甲基化阻断酶切。

• 参考文献
  1. Song, Q. et al. (2010). Anal.Chem. [Epub ahead of print].
  2. Zhang, P. et al. (2010). ProteinExpr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].