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酶试剂 >> 限制性内切酶
Nt.CviPII
Nt.CviPII图片
半岛bd体育手机客户端 别名: 限制性内切酶Nt.CviPII
限制酶产地: 国产限制性内切酶
半岛bd体育手机客户端 介绍
  • Nt.CviPII 可用于NicE-Seq 技术进行高分辨率开放染色质分析。如需了解更多信息,请参阅常见问题和操作步骤(下方)。
  • 这是一种切刻内切酶,产生的DNA 分子是“切刻”的,而不是切断的
  • 酶切位点:(0/-1)CCD

Nt.CviPII 是一种切刻内切酶,仅切割双链 DNA 底物上的一条链。酶切 pUC19 的终产物是一系列 25 到 200 bp 的片段。酶切 CCT 的效率低于 CCG 和 CCA。某些 CCT 位点没有被切割。(根据 NEB 的实验观察。)

半岛bd体育手机客户端 来源

克隆自小球藻病毒( Chlorellavirus) NYs-1 的截短型 Nt.CviPII 切刻内切酶基因,与 Mxe GyrA 内含肽、几丁质结合域在大肠杆菌中融合表达。

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中,37℃ 下,1 小时内酶切 1 ?g pUC19 DNA 产生大小在 25 至 200 bp 之间稳定分布的片段所需的酶量。

    反应条件

    1X rCutSmart? 缓冲液
    Incubate at 37℃

    1X rCutSmart? 缓冲液
    50 mM Potassium Acetate
    20 mM Tris-acetate
    10 mM Magnesium Acetate
    100 ?g/ml Recombinant Albumin
    (pH 7.9 @ 25℃)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer? r1.1: 10%
    NEBuffer? r2.1: 100%
    NEBuffer? r3.1: 25%
    rCutSmart? Buffer: 100%

    稀释兼容性

    • 稀释液 A

    贮存溶液

    20 mM Tris-HCl
    100 mM NaCl
    50% Glycerol
    pH 8 @ 25℃

    热失活

    65℃ for 20 minutes

    甲基化敏感性

    dam甲基化: 不敏感
    dcm甲基化: 不敏感
    CpG甲基化: 阻断酶切

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    单独销售的组分

    • rCutSmart? 缓冲液

  • 注意事项

    1. 实验证明该酶还具有核酸外切酶活性。因此在大多数反应中建议**反应时间为 1 小时。凝胶电泳检测时,建议上样缓冲液中 SDS 的终浓度为 0.4%。
    2. 因为反应中酶的稳定性,即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率,除非增加酶量。如需了解更多信息,请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
    3. Nt.CviPII 是一种切刻内切酶,仅切割双链 DNA 底物上的一条链。酶切 pUC19 的终产物是一系列 25 到 200 bp 的片段。酶切 CCT 的效率低于 CCG 和 CCA。某些 CCT 位点没有被切割。(根据 NEB 的实验观察)
    4. CpG 甲基化阻断酶切。

  • 参考文献

    1. Song, Q. et al. (2010). Anal.Chem. [Epub ahead of print].
    2. Zhang, P. et al. (2010). ProteinExpr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].

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