• 这是一种切刻内切酶
• 产生的 DNA 分子是“切刻”的，而不是切断的
• 限制性内切酶酶切位点：GAGTC（4/-5）

Nt.BstNBI 是一种位点特异性内切酶，仅切割双链 DNA 底物上的一条链。切刻内切酶在识别序列后第 4 个碱基的 3? 端产生单链切刻。

重点

• N.BstNB I 催化其识别序列 3' 端的单链切刻。

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自嗜热脂肪芽孢杆菌（ Bacillus stereothermophilus）33M（Z. Chen）的 Nt.BstNBI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，55℃ 条件下，1 小时内酶切 1 ?g T7 DNA 所需的酶量。
  噬菌体 T7 DNA 与 GAGTC 片段非常接近，是测定酶活性的最便捷的底物。Nt.BstNBI 切割噬菌体 T7 DNA 可产生 13 kb、9 kb、7 kb、6 kb 和 4 kb 五种条带。

  反应条件

  1X NEBuffer? r3.1
  Incubate at55℃

  1X NEBuffer? r3.1
  100 mM NaCl
  50 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 0%
  NEBuffer? r2.1: 10%
  NEBuffer? r3.1: 100%
  rCutSmart? Buffer: 10%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml Recombinant Albumin
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

  在不同温度下的活性

  @37℃: 50%

• 注意事项
  1. 如需了解该酶（以及其他切刻酶）在不同温度下活性的详细信息，请参阅不同温度对切刻内切酶的影响。
  2. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。

• 参考文献
  1. Song, Q. et al. (2010). Anal.Chem. [Epub ahead of print].
  2. Zhang, P. et al. (2010). ProteinExpr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].