- 在 rCutSmart™ 缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- 这是一种切刻内切酶
- 生成“有切刻”的 DNA 分子而非切开的 DNA 分子
- 限制性内切酶酶切位点:GTCTC(1/-5)
Nt.BsmAI 是一种切刻内切酶,仅切割双链 DNA 底物上的一条 DNA 链。
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来源
大肠杆菌菌株,其表达嗜热脂肪芽孢杆菌(
Bacillus stearothermophilus)A664 的 BsmAI 限制性基因的变体
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,37℃ 下,1 小时内将 1 µg 超螺旋质粒 DNA 转换为开环 DNA 所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37℃
1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 100%
NEBuffer™ r2.1: 50%
NEBuffer™ r3.1: 10%
rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性
贮存溶液
10 mM Tris-HCl
50 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25℃
热失活
65℃ for 20 minutes
甲基化敏感性
dam 甲基化: 不敏感
dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 阻断酶切
- 注意事项
- 如需了解该酶(以及其他切刻酶)在不同温度下活性的详细信息,请参阅不同温度对切刻内切酶的影响。
- CpG 甲基化阻断酶切。
- 参考文献
- Song, Q. et al. Anal. Chem. [Epub ahead of print].
- Zhang, P. et al. Protein Expr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].