• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 这是一种切刻内切酶
• 产生的“DNA”分子是切刻的，而不是切断的
• 限制性内切酶酶切位点：GCAGTG

Nb.BtsI 是一种切刻内切酶，仅切割双链 DNA 底物上的一条链。

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自嗜热葡萄糖芽孢杆菌（ Bacillus thermoglucosidasius）（X.Pan）的大型亚单位 BtsI 限制性基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内将 1 ?g 超螺旋质粒 ΦX174 RF I DNA 转换为开环 DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 75%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 75%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

• 注意事项
  1. Nb.BtsI 效率很高。绝大多数情况下，推荐 1 ?g DNA 添加 1 ?l 酶，温育 1-2 个小时。
  2. Nb.BtsI 在 55℃ 条件下活性为 100%。
  3. 若要进行凝胶电泳，请添加包含终浓度 0.4% SDS 的上样染料。
  4. 如需了解该酶（以及其他切刻酶）在不同温度下活性的详细信息，请参阅不同温度对切刻内切酶的影响。
  5. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。

• 参考文献
  1. Song, Q. et al. (2010). Anal. Chem. [Epub ahead of print].
  2. Zhang, P. et al. (2010). Protein Expr. Purif. 69, 226-234. [Epub 2009 Sep 9].