• 符合省时酶（Time-Saver?）标准，可在 5-15 分钟内完成酶切
• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 限制性内切酶酶切位点：G/AWTC

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自丝状栖热菌（ Thermus filiformis）（来自伦敦大学学院的 D. Cowan）的 TfiI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，65℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g λ DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at65℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 50%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 100%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 C

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  250 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  0.15% Triton? X-100
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  否

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切

  同裂酶

  PfeI
  

  在不同温度下的活性

  @37℃: 10%

• 注意事项
  1. 哺乳动物基因组 DNA 的酶切被某些 CpG 甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切。
  2. 对于不能热失活的酶，我们建议进行柱纯化（如 Monarch? PCR & DNA 纯化试剂盒），或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收（建议使用 Monarch DNA 胶回收试剂盒），或酚/氯仿抽提。