- AarI 的同裂酶
- 用于 Golden Gate 组装
- IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割
- 酶切需要两个或两个以上识别位点。随附 PaqCI 活化剂，以改善酶切效果
- PaqCI 在 Golden Gate 组装中的使用指南
- 限制性内切酶酶切位点：CACCTGC(4/8)
- 查看 NEB Inspired 博客文章，了解如何使用 PaqCI 组装超过 20 个片段
PaqCI 可以完全酶切并且不会出现星号活性
按照说明书推荐方案，使用 8 个单位的 PaqCI（NEB #R0745）或 AarI（Thermo Fisher）都可以酶切 1 µg Lambda DNA。使用 1% 的琼脂糖凝胶对酶切产物进行分析。结果显示，与 AarI 不同，PaqCI 可完全酶切并且未出现星号活性。
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来源
大肠杆菌菌株，携带有克隆自
Paucibacter Aquatile 并经修饰的 PaqCI 基因。
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Supplement with 1X PaqCI 活化剂
Incubate at 37℃
1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 10%
NEBuffer™ r2.1: 100%
NEBuffer™ r3.1: 10%
rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性
贮存溶液
10 mM Tris-HCl
300 mM NaCl
1 mM DTT
500 µg/ml BSA
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25℃
热失活
65℃ for 20 minutes
甲基化敏感性
dam 甲基化: 不敏感
dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 甲基化与酶切位点重叠影响酶切
同裂酶
AarI
- 注意事项
- PaqCI 是 AarI 的完全同裂酶。
- CpG 甲基化影响酶切。更多相关信息，请查看“Dam-Dcm 和 CpG 甲基化”。
- PaqCI 完全酶切需要多个识别位点。因此，NEB 随酶提供“PaqCI 活化剂”，可以按 1:1 的比例添加到反应中（例如，1 ul 酶添加 1 ul 的 PaqCI 活化剂）。请注意，对于 Golden Gate 组装反应，PaqCI 活化剂的用量取决于组装的片段数量。
- 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性
