• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切

• IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割

• 酶切需要两个或两个以上识别位点。请查看下表中的酶列表和使用建议以及背景信息文章。

• 限制性内切酶酶切位点：GCCGAG(21/19)

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自脑膜炎双球菌（ Neisseria meningitidis）2491（Achtman, M.）的 NmeAIII 基因

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 ?g ΦX174 RF DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 10%
  NEBuffer? r2.1: 10%
  NEBuffer? r3.1: <10%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 B

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  300 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  0.32 mM S-adenosylmethionine (SAM)
  500 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

• 注意事项
  1. 不建议用 > 5 units /?g DNA 的 NmeAIII 过量酶切。
  2. NmeAIII 需要在反应中添加 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）以实现**活性（SAM 已添加在酶溶液中）。
  3. NmeAIII 酶切需要两个识别位点。因此，pUC19 中的单个 NmeAIII 位点不能被酶切。10 倍过量酶切可切割不到一半的 DNA。
  4. 酶切位置可能会移动一个碱基对，具体取决于识别位点与切割位置之间的 DNA 序列。对于给定的序列，通常会以一个切割位点为主进行酶切。
  5. 冰浴或 25℃ 温育时会有明显酶切。
  6. 即使 NmeAIII 过量，也会产生一个稳定的部分酶切模式。1 个单位是指产生这种稳定的部分酶切模式所需的酶量。
  7. 基于反应中酶的稳定性，除非增加酶量，否则即便温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率。如需了解有关此主题的更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  8. 酶切需要两个或两个以上识别位点。请查看下表中的酶列表和使用建议以及背景信息文章。
  9. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。