• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 限制性内切酶酶切位点：TGG/CCA

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自微球菌属（ Micrococcus）（C. Polisson）的 MscI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，在 37℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g λ DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 25%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 100%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 C

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  150 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  0.05% Triton? X-100
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切
  CpG甲基化: 不敏感

  同裂酶

  BalI
  MlsI
  MluNI
  Mox20I
  Msp20I
  

• 注意事项
  1. MscI 是 BalI 的同裂酶。
  2. 盐浓度高于 150 mM 时酶切受到抑制。
  3. pBR322 上**的 MscI 位点与 dcm 甲基化位点重叠；因此，只有在 dcm– 宿主菌中生长的 pBR322 才能被用于克隆。
  4. dcm 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切。