• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 限制性内切酶酶切位点：TCN/GA

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大肠杆菌菌株，携带有来自幽门螺杆菌（ Helicobacter pylori）188（S.A. Thompson）的 Hpy188I 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g pBR322 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 25%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 50%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  100 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

• 注意事项
  1. Hpy188I 切割产生的 DNA 片段含有单碱基 3? 突出端，它比平末端更难连接。
  2. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  3. dam 甲基化与酶切位点重叠阻断酶切。
  4. 延长酶切时间、高浓度酶或 >5% 的甘油浓度可能产生星号活性