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酶试剂 >> 限制性内切酶
HgaI
HgaI图片
半岛bd体育手机客户端 别名: 限制性内切酶HgaI
限制酶产地: 国产限制性内切酶
半岛bd体育手机客户端 介绍
  • IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列,并在识别序列之外进行切割。
  • 限制性内切酶酶切位点:GACGC(5/10)

半岛bd体育手机客户端 来源

大肠杆菌菌株,携带来自鸡嗜血杆菌( Haemophilus gallinarum)(ATCC 14385)的 HgaI 基因。

  • 特性和用法

    单位定义

    一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内酶切 1 ?g ΦX174 DNA 所需的酶量。

    反应条件

    1X NEBuffer? r1.1
    Incubate at 37℃

    1X NEBuffer? r1.1
    10 mM Bis-Tris-Propane-HCl
    10 mM MgCl2
    100 ?g/ml 重组白蛋白
    (pH 7 @ 25℃)

    在不同缓冲液中的活性

    NEBuffer? r1.1: 100%
    NEBuffer? r2.1: 100%
    NEBuffer? r3.1: 25%
    rCutSmart? Buffer: 100%

    稀释兼容性

    • 稀释液 A

    贮存溶液

    10 mM Tris-HCl
    50 mM KCl
    1 mM DTT
    0.1 mM EDTA
    50% Glycerol
    200 ?g/ml BSA
    pH 7.4 @ 25℃

    热失活

    65℃ for 20 minutes

    甲基化敏感性

    dam甲基化: 不敏感
    dcm甲基化: 不敏感
    CpG甲基化: 阻断酶切

    同裂酶

    CseI

  • 注意事项

    1. 在已知的 3,000 多种限制性内切酶中,只有少数几种酶能够产生超过 4 个碱基的突出末端,HgaI 就是其中一种。
    2. 建议消化每 ?g DNA,HgaI 的用量不 > 5 个单位。
    3. HgaI 在没有底物的情况下会失去活性,37℃ 条件下,1 小时后基本无活性。
    4. 因为反应中酶的稳定性,即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率,除非增加酶量。如需了解更多信息,请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
    5. CpG 甲基化阻断酶切。
    6. 延时酶切、高酶浓度或甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性

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