• 在 rCutSmart^™ 缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割
• 限制性内切酶酶切位点：GCGATG(10/14)

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自嗜热葡萄糖芽孢杆菌（Bacillus thermoglucosidasius）（X. Pan）的 BtgZI 基因

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中，60℃ 下，1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  Incubate at60℃

  1X rCutSmart™ 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 µg/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer™ r1.1: 10%
  NEBuffer™ r2.1: 25%
  NEBuffer™ r3.1: <10%
  rCutSmart™ Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 µg/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam 甲基化: 不敏感
  dcm 甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 影响酶切

  在不同温度下的活性

  @37℃: 50%

• 注意事项
  1. 哺乳动物基因组 DNA CpG 甲基化影响酶切。
  2. BtgZI 在酶切后仍能与 DNA 结合，并改变 DNA 电泳迁移率。可在电泳前添加终浓度为 0.5% 的 SDS 或纯化 DNA，以分离酶与 DNA 的结合。
  3. 基于反应中酶的稳定性，除非增加酶量，否则即便温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率。如需了解有关此主题的更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  4. 甘油浓度 >5% 条件下可能出现星号活性