• 符合省时酶（Time-Saver?）标准，可在 5-15 分钟内完成酶切
• 限制性内切酶酶切位点：CC/WGG

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大肠杆菌菌株，其携带从嗜热脂肪芽孢杆菌（ Bacillus stearothermophilus）N（D. Comb）克隆的 BstNI 基因

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，60℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g λ DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X NEBuffer? r3.1
  Incubate at60℃

  1X NEBuffer? r3.1
  100 mM NaCl
  50 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 10%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 100%
  rCutSmart? Buffer: 75%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  否

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

  同裂酶

  AjnI
  BciT130I
  BseBI
  Bst2UI
  EcoRII
  MvaI
  Psp6I
  PspGI
  

  在不同温度下的活性

  @37℃: 25%

• 注意事项
  1. BstNI 是 EcoRII 的同裂酶，但在不同位置切割 DNA。（EcoRII 在两个 C 残基之前切割）。
  2. BstNI 切割产生的 DNA 片段含有单碱基突出的 5? 末端，它比平末端更难连接。使用快速连接试剂盒可实现更高效的连接（NEB #M2200）。
  3. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  4. 对于不能热失活的酶，我们建议进行柱纯化（如 Monarch? PCR & DNA 纯化试剂盒），或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收（建议使用 Monarch DNA 胶回收试剂盒），或酚/氯仿抽提。
  5. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。