• IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割
• 限制性内切酶酶切位点：ACTGGG(5/4)

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自巨大芽孢杆菌（ Bacillus megaterium）（T. Le）的 BmrI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g λ DNA（Hind III 酶切）所需的酶量。

  反应条件

  1X NEBuffer? r2.1
  Incubate at 37℃

  1X NEBuffer? r2.1
  50 mM NaCl
  10 mM Tris-HCl
  10 mM MgCl₂
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 75%
  NEBuffer? r2.1: 100%
  NEBuffer? r3.1: 75%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 B

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  300 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  500 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  65℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

  同裂酶

  BfiI+
  BmuI
  

• 注意事项
  1. BmrI 切割产生的 DNA 片段含有单碱基 3? 突出末端，它比平末端更难连接。
  2. 无论反应液中是否含有 Mg²⁺，BmrI 都能特异性地切割 DNA。
  3. EDTA 存在时也具有活性。
  4. 在 rCutSmart 缓冲液中可能出现星号活性。
  5. 因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过 1 小时也不会提高酶切效率，除非增加酶量。如需了解更多信息，请参阅限制性内切酶在反应中的活性。
  6. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。