• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• 限制性内切酶酶切位点：C/TAG

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自脆弱拟杆菌（ Bacteroides fragilis）（VPI 3392）的 BfaI 基因

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 条件下，1 小时内酶切 1 ?g λ DNA 所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: <10%
  NEBuffer? r2.1: 10%
  NEBuffer? r3.1: <10%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 B

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  300 mM NaCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  500 ?g/ml Recombinant Albumin
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  80℃ for 20 minutes

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 不敏感
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

  同裂酶

  FspBI
  MaeI
  SspMI
  XspI
  

• 注意事项
  1. BfaI 是 Mae I 和 Rma I 的完全同裂酶。
  2. BfaI 几乎不能酶切未纯化的 PCR 产物。因此，在用 BfaI 酶切前，应纯化 PCR 产物（建议使用 Monarch PCR & DNA 纯化试剂盒）。
  3. 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。
  4. 延时酶切条件下可能出现星号活性。