- 符合省时酶(Time-Saver?)标准,可在 5-15 分钟内完成酶切
- 在 rCutSmart?缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列,并在识别序列之外进行切割
- 限制性内切酶酶切位点:(10/15)ACNNNNGTAYC(12/7)
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大肠杆菌菌株,携带有克隆自球形芽孢杆菌(
Bacillus sphaericus)SDZ-8(R. Morgan)的 BaeI 基因
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内酶切 1 ?g Lambda DNA 所需的酶量。反应条件
1X rCutSmart? 缓冲液
Incubate at 37℃
1X rCutSmart? 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 ?g/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer? r1.1: 50%
NEBuffer? r2.1: 100%
NEBuffer? r3.1: 50%
rCutSmart? Buffer: 100%稀释兼容性
贮存溶液
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 ?g/ml BSA
0.32 mM S-adenosylmethionine (SAM)
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25℃
热失活
65℃ for 20 minutes甲基化敏感性
dam甲基化: 不敏感
dcm甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 某些甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切
在不同温度下的活性
@25℃: 100%
- 注意事项
- BaeI 切割 DNA 底物两次,切下其识别位点后产生一个 28 碱基对的片段,该片段包含 5 个碱基的 3? 突出端。
- BaeI 除了在其确定的切割位点处切割,也能在其识别位点外的一个碱基对处进行切割。
- 某些 CpG 甲基化与酶切位点的重叠组合阻断酶切。