• 在 rCutSmart^?缓冲液中具有 100% 活性（超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液），便于进行双酶切
• IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割
• 限制性内切酶酶切位点：GGATC(4/5)

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大肠杆菌菌株，携带有克隆自洛菲不动杆菌（ Acinetobacter lwoffii）（R. Morgan）的 AlwI 基因。

• 特性和用法

  单位定义

  一个单位是指在 50 ?l 的总反应体系中，37℃ 下，1 小时内酶切 1 ?g λ DNA（dam-）所需的酶量。

  反应条件

  1X rCutSmart? 缓冲液
  Incubate at 37℃

  1X rCutSmart? 缓冲液
  50 mM Potassium Acetate
  20 mM Tris-acetate
  10 mM Magnesium Acetate
  100 ?g/ml Recombinant Albumin
  (pH 7.9 @ 25℃)

  在不同缓冲液中的活性

  NEBuffer? r1.1: 50%
  NEBuffer? r2.1: 50%
  NEBuffer? r3.1: 10%
  rCutSmart? Buffer: 100%

  稀释兼容性

  • 稀释液 A

  贮存溶液

  10 mM Tris-HCl
  50 mM KCl
  1 mM DTT
  0.1 mM EDTA
  200 ?g/ml BSA
  50% Glycerol
  pH 7.4 @ 25℃

  热失活

  否

  甲基化敏感性

  dam甲基化: 阻断酶切
  dcm甲基化: 不敏感
  CpG甲基化: 不敏感

  同裂酶

  AclWI
  BinI+
  BspPI
  

• 注意事项
  1. AlwI 切割产生的 DNA 片段含有单碱基突出的 5? 末端，它比平末端更难连接。
  2. dam 甲基化阻断该酶酶切。如需了解更多信息，请参阅 Dam-Dcm 和 CpG 甲基化。
  3. 对于不能热失活的酶，我们建议进行柱纯化（如 Monarch? PCR & DNA 纯化试剂盒），或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收（建议使用 Monarch DNA 胶回收试剂盒），或酚/氯仿抽提。
  4. 延长酶切时间、高浓度酶或 >5% 的甘油浓度可能产生星号活性