羟自由基清除能力试剂盒

Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和 Fenton反应产生的 OH·量成正比，Fenton反应生成的羟自由基与水杨酸反应，生成物在 510nm处有特殊吸收。采用固定反应时间法，根据测试物在 510nm处吸光度值的大小来判断测试物清除羟自由基的能力。

试剂盒的组分与配制：

试剂名称	规格	保存要求
试剂一	液体 10mL×1瓶	4℃保存
试剂二	粉体×1瓶	4℃保存	临用前甩几下使试剂落入底部，再加 12mL无水乙醇，充分溶解备用。
试剂三	液体×1支	4℃保存	临用前甩几下或离心使试剂落入底部，取 60μL至新的容器中，再加 6mL蒸馏水溶解备用。

所需的半岛游戏平台官网入口网址 和用品：

酶标仪、96孔板、天平、水浴锅、离心机、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水。

羟自由基清除能力测定：

建议正式实验前选取 2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

1、样本制备：

①组织样本：

称取 0.1g样本(若是干样可取 0.02-0.05g)，加入 1mL的 80%乙醇(自备)进行匀浆，匀浆后转入 2mL离心管中；于 50℃，200-300W条件下超声提取 10min(间隔 5min振荡混匀一次)。12000rpm，离心 10min，取上清，置冰上待测。

②液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。

2、上机检测：

①酶标仪预热 30min，调节波长至 510nm。

②不同样本清除能力不一，可先选取 2个样本做检测，若 A测定-A对照接近零，需对样本进行稀释(用提取液稀释即可)后再检测，或降低样本加样量(如减至 20μL，蒸馏水相应增加)。

③在 EP管中依次加入：

试剂名称(μL)	测定管	对照	空白(仅做一次)
试剂一	50	50	50
试剂二	50	50	50
样本	50	50
蒸馏水	200	250	250
试剂三	50		50
混匀，37℃反应 20min(准确时间)，取 200μL转移至 96孔板内，立即于 510nm处读取各管吸光值 A。

结果计算：

羟自由基清除率(%)=[A空白-(A测定-A对照)]÷A空白×100%