还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒
测定原理
二硫代二硝基苯甲酸与巯基化合物反应时能产生一种黄色化合物，可进行比色定量测定。
试剂组成与配制
试剂一：
甲粉×1瓶，乙液 50ml×1瓶，4℃保存 6个月。
甲粉：加 90～100℃的热双蒸水 170ml，充分完全溶解；
试剂一应用液的配制：
将已配好的甲液与乙液充分混合。此为过饱和溶液，室温静置冷却后，如有结晶，则取上清进行实验，室温保存 6个月。
试剂二：
粉剂×1瓶，用时加双蒸水至 200ml溶解，用我所赠送的塑料瓶室温保存 6个月。
试剂三：
粉剂×1支，用时加双蒸水至 50ml溶解，避光 4℃保存 6个月。
试剂四：粉剂×4支，用时每支加双蒸水 10ml溶解，避光冷藏可保存 5天。
试剂五：
GSH标准品粉剂 3.07mg×3支，4℃保存 6个月。试剂六：GSH标准品溶剂贮备液 10ml×1瓶，4℃保存 6个月。
GSH标准品溶剂应用液的配制：
按 GSH标准品溶剂贮备液:双蒸水=1:9,加入 9倍体积的双蒸水进行稀释，现用现配。
1mmol/L GSH标准品溶液的配制：
GSH的分子量为 307，每次测定前将 3.07mg的 GSH标准品加入到 10ml的 GSH标准品溶剂应用液中，混匀，现用现配。
20μmol/L GSH标准品溶液的配制：取 1mmol/LGSH标准品溶液 0.2ml加入 GSH标准品溶剂应用液 9.8ml，现用现配。
操作步骤
1、上清液的制备：取待测样本 0.5ml,加试剂一应用液 2ml混匀，3500～4000转/分离心 10分钟，取上清液 1ml进行显色反应。
2、显色反应：
空白管 |
标准管 |
测定管 |
|
试剂一应用液(ml) |
1.0 |
||
20μmol/LGSH标准品(ml) |
1.0 |
||
上清液(ml) |
1.0 |
||
试剂二(ml) |
1.25 |
1.25 |
1.25 |
试剂三(ml) |
0.25 |
0.25 |
0.25 |
试剂四(ml) |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
混匀，静置 5分钟，420nm处，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
3、计算：
①、按标准品计算：
GSH含量(gGSH/ L) = (测定OD值-空白OD值) / (标准OD值-空白OD值) × 标准品浓度(20×10-6mol/L) × GSH分子量(307)×样本测定前稀释倍数
[注]:标准品浓度为 20μmol/L=20×10-6mol/L
②、按标准曲线法查表：
100μmol/L GSH标准溶液的配制：取 1mmol/L GSH标准溶液，按 1mmol/L GSH标准溶液:标准品溶剂应用液=1:9的比例进行 10倍稀释。取 100μmol/L GSH标准溶液用 GSH标准品溶剂应用液按下表进行稀释:
稀释管 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
GSH标准品溶剂应用液(μl) |
1000 |
800 |
600 |
400 |
200 |
0 |
100μmol/L GSH标准溶液(μl) |
0 |
200 |
400 |
600 |
800 |
1000 |
稀释后的 GSH标准品浓度(μmol/L) |
0 |
20 |
40 |
60 |
80 |
100 |
将稀释后的 GSH标准溶液按操作表操作，空白管调零，420 nm处，1cm光径，测定各管吸光度值，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，做标准曲线，将测定管的吸光度查曲线上相对应的浓度。
注意事项
1、血液中的 GSH几乎全部存在于红细胞内，可以用每升全血中 GSH的克数来表示，也可用每克 Hb中 GSH的含量来表示。
2、计算时应用消光系数，故比色计要校正波长。用标准管计算较方便、准确。
3、吸取上清时，最好用带刻度的 5ml滴管，或者用移液器，避开表面的一层薄膜，插到上清液中吸取 2ml做显色反应。
4、最好每批试验做 2个标准管、空白管，以减少操作误差。
测定意义
谷胱甘肽(GSH)是一种低分子清除剂，它可清除 O2-、H2O2、LOOH。谷胱甘肽是谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的一种三肽，是组织中主要的非蛋白质的巯基化合物，并且是 GSH—PX和 GST两种酶类的底物，为这二种酶分解氢过氧化物所必需，它并且能稳定含巯基的酶和防止血红蛋白及其它辅因子受氧化损伤，最近还证明 GSH也参与使维生素 E恢复到还原态的作用，缺乏或耗竭 GSH会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用或加重其中毒作用，这可能与增加氧化损伤有关，因而 GSH的量的多少是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素。
