榧犱激瀵掓矙闂ㄦ皬鑿屽洖澶嶇獊鍙樿瘯楠岋紝鍙堢ОAmes璇曢獙銆備簬 1975骞村缓绔嬪苟涓嶆柇鍙戝睍瀹屽杽锛岀洰鍓嶅凡琚笘鐣屽悇鍥藉箍涓洪噰鐢紝宸茬粡鎴愪负姣掔悊瀛﹀疄楠屽蹇呴渶寮€灞曠殑閲嶈瀹為獙椤圭洰銆侫mes瀹為獙鐢ㄤ簬妫€娴嬪緟鍒嗘瀽鐗╄川鐨勮嚧绐佸彉浣滅敤锛岃楠岀伒鏁忋€侀珮鏁堛€佹娴嬭寖鍥村箍銆侟/p>

Ames 璇曢獙鍘熺悊

Ames 璇曢獙鍒╃敤榧犱激瀵掓矙闂ㄦ皬缁勬皑閰歌惀鍏荤己闄峰瀷鑿屾牚锛岃缂洪櫡鍨嬭弻鏍笉鑳藉悎鎴愮粍姘ㄩ吀锛屾晠鍦ㄧ己涔忕粍姘ㄩ吀鐨勫煿鍏诲熀涓婏紝浠呭皯鏁拌嚜鍙戝洖澶嶇獊鍙樼殑缁嗚弻鐢熼暱锛涘亣濡傛湁鑷寸獊鍙樼墿瀛樺湪锛屽垯钀ュ吇缂洪櫡鍨嬬殑缁嗚弻璇卞鍥炲绐佸彉鎴愬師鍏诲瀷锛屽洜鑰岃兘鐢熼暱褰㈡垚鑿岃惤锛屾嵁姝ゅ垽鏂彈璇曠墿鏄惁涓鸿嚧绐佸彉鐗┿€傛煇浜涜嚧绐佸彉鐗╅渶瑕佷唬璋㈡椿鍖栧悗鎵嶈兘寮曡捣鍥炲绐佸彉锛 鏁呴渶鍔犲叆缁忚瀵煎墏璇卞鐨勫ぇ榧犺倽鍒跺鐨 S9娣峰悎娑层€傚寳浜眹鏅烘嘲搴峰尰鑽妧鏈湁闄愬叕鍙搁拡瀵笰mes璇曢獙寮€鍙慉mes璇曞墏鐩掞紝 鏈瘯鍓傜洅鐪佸幓浜嗗煿鍏诲熀鎴愬垎鍑嗗銆佽瀵 S9 鍒跺銆佽弻鏍 閴村畾銆佽弻鏍煿鍏荤瓑鏃堕棿锛屽彲浠ョ洿鎺ヤ娇鐢紝澶уぇ缂╃煭浜嗗疄楠屽懆鏈燂紱璇曞墏鐩掑悇鎴愬垎鍧囩粡杩囦弗鏍肩殑璐ㄩ噺妫€娴嬶紝鏃犳潅鑿屾薄鏌擄紝鑿屾牚鐗规€т笌娲昏弻鏁扮洰浠ュ強璇卞 S9 娲绘€у潎绗﹀悎 Ames 璇曢獙瑕佹眰锛屽疄楠岀粨鏋滃噯纭€佸彲闈犮€侀噸鐜版€ч珮銆侫mes璇曞墏鐩掑簲鐢ㄥ箍娉涳紝鍙繘琛岄鍝佷笌楗敤姘淬€佸寲瀛﹀搧銆佹礂娑ゅ墏銆佹秷姣掑墏銆侀鍝佹坊鍔犲墏銆佽嵂鐗╂畫鐣欍€佸寲濡嗗搧銆佸鍣ㄤ笌鍖呰鏉愭枡绛夊涓柟闈㈢殑閬椾紶姣掔悊瀛︽娴嬨€侟/p>

Ames璇曢獙瀵煎垯

1 鑼冨洿

鏈鑼冪‘瀹氫簡榧犱激瀵掓矙闂ㄦ皬鑿岋紡鍥炲绐佸彉璇曢獙鐨勫熀鏈師鍒欍€佽姹傚拰鏂规硶銆侟/p>

鏈鑼冮€傜敤浜庡寲濡嗗搧鍘熸枡鍙婂叾浜у搧鐨勫熀鍥犵獊鍙樻娴嬨€侟/p>

2 瑙勮寖鎬у紩鐢ㄦ枃浠迭/strong>

OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No.471,Adopted:21,July 1997)銆侟/p>

3 瀹氫箟

3.1 鍥炲绐佸彉(Reverse mutation)

缁嗚弻鍦ㄥ寲瀛﹁嚧绐佸彉鐗╀綔鐢ㄤ笅鐢辫惀鍏荤己闄峰瀷鍥炲彉鍒板師鍏诲瀷(prototroph)銆侟/p>

3.2 鍩哄洜绐佸彉 (Gene mutation)

鍦ㄥ寲瀛﹁嚧绐佸彉鐗╀綔鐢ㄤ笅缁嗚優DNA涓⒈鍩哄鐨勬帓鍒楅『搴忓彂鐢熷彉鍖栥€侟/p>

3.3 纰卞熀缃崲绐佸彉 (Base substitution mutation)

寮曡捣DNA閾句笂涓€涓垨鍑犱釜纰卞熀瀵圭殑缃崲銆侟/p>

纰卞熀缃崲鏈夎浆鎹?transition)鍜岄鎹?transversion)涓ょ褰㈠紡銆侟/p>

杞崲鏄疍NA閾句笂鐨勪竴涓槯鍟惰鍙︿竴鍢у暥鎵€鏇夸唬锛屾垨涓€涓槍鍛よ鍙︿竴鍢屽懁鎵€浠ｆ浛銆侟/p>

棰犳崲鏄疍NA閾句笂鐨勪竴涓槯鍟惰鍙︿竴鍢屽懁鎵€鏇夸唬锛屾垨涓€涓槍鍛よ鍙︿竴鍢у暥鎵€浠ｆ浛銆侟/p>

3.4 绉荤爜绐佸彉( Frameshift mutation)

寮曡捣DNA閾句笂澧炲姞鎴栫己澶变竴涓垨澶氫釜纰卞熀瀵广€侟/p>

3.5 榧犱激瀵掓矙闂ㄦ皬鑿?鍥炲绐佸彉璇曢獙( Salmonella typhimurium/reverse mutation assay)

鍒╃敤涓€缁勯紶浼ゅ瘨娌欓棬姘忕粍姘ㄩ吀缂洪櫡鍨嬭瘯楠岃弻鏍祴瀹氬紩璧锋矙闂ㄦ皬鑿岀⒈鍩虹疆鎹㈡垨绉荤爜绐佸彉鐨勫寲瀛︾墿璐ㄦ墍璇卞彂鐨勭粍姘ㄩ吀缂洪櫡鍨?his-)鈫掑師鍏诲瀷(his+)鍥炲绐佸彉鐨勮瘯楠屾柟娉曘€侟/p>

3.6 S₉

缁忓姘仈鑻?PCB娣峰悎鐗?鎴栬嫰宸存瘮閽犲拰尾-钀橀粍閰粨鍚堣瀵肩殑澶ч紶鍒跺鑲濆寑娴嗭紝鍦?,000g涓嬬蹇?0min鍚庣殑鑲濆寑娴嗕笂娓呮恫銆侟/p>

4 鍘熺悊

榧犱激瀵掓矙闂ㄦ皬缁勬皑閰歌惀鍏荤己闄峰瀷鑿屾牚涓嶈兘鍚堟垚缁勬皑閰革紝鏁呭湪缂轰箯缁勬皑閰哥殑鍩瑰吇鍩轰笂锛屼粎灏戞暟鑷彂鍥炲绐佸彉鐨勭粏鑿岀敓闀裤€傚亣濡傛湁鑷寸獊鍙樼墿瀛樺湪锛屽垯钀ュ吇缂洪櫡鍨嬬殑缁嗚弻鍥炲绐佸彉鎴愬師鍏诲瀷锛屽洜鑰岃兘鐢熼暱褰㈡垚鑿岃惤锛屾嵁姝ゅ垽鏂彈璇曠墿鏄惁涓鸿嚧绐佸彉鐗┿€傚彲浣跨敤鍖椾含姹囨櫤娉板悍鍖昏嵂鎶€鏈湁闄愬叕鍙哥爺鍙戠敓浜х殑Ames璇曞墏鐩掞紝璇曞墏鐩掔渷鍘讳簡鍩瑰吇鍩烘垚鍒嗗噯澶囥€佽瀵 S9 鍒跺銆佽弻鏍 閴村畾銆佽弻鏍煿鍏荤瓑鏃堕棿锛屽彲浠ョ洿鎺ヤ娇鐢紝澶уぇ缂╃煭浜嗗疄楠屽懆鏈熴€侟/p>

鏌愪簺鑷寸獊鍙樼墿闇€瑕佷唬璋㈡椿鍖栧悗鎵嶈兘寮曡捣鍥炲绐佸彉锛 鏁呴渶鍔犲叆缁忚瀵煎墏璇卞鐨勫ぇ榧犺倽鍒跺鐨凷₉娣峰悎娑层€侟/p>

5 浠櫒鍜岃澶嘃/strong>

鍩瑰吇绠便€佹亽娓╂按娴淬€佹尟鑽℃按娴存憞搴娿€佸帇鍔涜捀姹芥秷姣掑櫒銆佸共鐑儰绠便€佷綆娓╁啺绠?-80鈩? 鎴栨恫姘敓鐗╁鍣ㄣ€佹櫘閫氬啺绠便€佸ぉ骞?绮惧瘑搴?.1g鍜?.0001g)銆佹贩鍖€鎸崱鍣ㄣ€佸寑娴嗗櫒銆佽弻钀借鏁板櫒銆佷綆娓╅珮閫熺蹇冩満锛岀幓鐠冨櫒鐨跨瓑銆侟/p>

6 鍩瑰吇鍩哄拰璇曞墏

6.1 0.5mmol/L缁勬皑閰?0.5mmol/L鐢熺墿绱犳憾娑秉/p>

鎴愬垎锛 L-缁勬皑閰?MW 155) 78mg

D-鐢熺墿绱?MW 244) 122mg

鍔犺捀棣忔按鑷 1000mL

閰嶅埗锛氬皢涓婅堪鎴愬垎鍔犵儹锛屼互婧惰В鐢熺墿绱狅紝鐒跺悗鍦?.068MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傝串浜?鈩冨啺绠便€侟/p>

6.2 椤跺眰鐞艰剛鍩瑰吇鍩裹/p>

鎴愬垎锛 鐞艰剛绮 1.2g

姘寲閽 1.0g

鍔犺捀棣忔按鑷 200mL

閰嶅埗锛氫笂杩版垚鍒嗘贩鍚堝悗锛屼簬0.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傚疄楠屾椂锛屽姞鍏?.5mmol/L缁勬皑閰糕€?.5mmol/L鐢熺墿绱犳憾娑?0mL銆侟/p>

6.3 Vogel-Bonner (V-B) 鍩瑰吇鍩篍

鎴愬垎锛氭灨妞介吀(C₆H₈O₇路H₂O) 100g

纾烽吀姘簩閽?K₂HPO₄) 500g

纾烽吀姘㈤摰閽?NaNH₄HPO₄路4H₂O) 175g

纭吀闀?MgSO₄路7H₂O) 10g

鍔犺捀棣忔按鑷 1000mL

閰嶅埗锛氬厛灏嗗墠涓夌鎴愬垎鍔犵儹婧惰В鍚庯紝鍐嶅皢婧惰В鐨勭～閰搁晛缂撶紦鍊掑叆瀹归噺鐡朵腑锛屽姞钂搁姘磋嚦1000mL銆備簬0.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傚偍浜?鈩冨啺绠便€侟/p>

6.4 20%钁¤悇绯栨憾娑秉/p>

鎴愬垎锛氳憽钀勭硸 200g

鍔犺捀棣忔按鑷 1000mL

閰嶅埗锛氬姞灏戦噺钂搁姘村姞娓╂憾瑙ｈ憽钀勭硸锛屽啀鍔犺捀棣忔按鑷?000mL銆備簬0.068MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傚偍浜?鈩冨啺绠便€侟/p>

6.5 搴曞眰鐞艰剛鍩瑰吇鍩裹/p>

鎴愬垎锛氱惣鑴傜矇 7.5g

钂搁姘 480mL

V-B鍩瑰吇鍩篍 10mL

20%钁¤悇绯栨憾娑 10mL

閰嶅埗锛氶鍏堝皢鍓嶄袱绉嶆垚鍒嗕簬0.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min鍚庯紝鍐嶅姞鍏ュ悗涓ょ鎴愬垎锛屽厖鍒嗘贩鍖€鍊掑簳灞傚钩鏉裤€傛寜姣忕毧25mL鍒跺骞虫澘锛屽喎鍑濆浐鍖栧悗鍊掔疆浜?7鈩冨煿鍏荤涓?4h锛屽鐢ㄣ€侟/p>

6.6 钀ュ吇鑲夋堡鍩瑰吇鍩裹/p>

鎴愬垎锛氱墰鑲夐珮 2.5g

鑳 鑳 5.0g

纾烽吀姘簩閽?K₂HPO₄) 1.0g

鍔犺捀棣忔按鑷 500mL

閰嶅埗锛氬皢涓婅堪鎴愬垎娣峰悎鍚庯紝浜?.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傚偍浜?鈩冨啺绠便€侟/p>

6.7 鐩愭憾娑?1.65mol/L KCl+0.4mol/L MgCl₂)

鎴愬垎锛氭隘鍖栧(KCl) 61.5g

姘寲闀?MgCl₂路6H₂O) 40.7g

鍔犺捀棣忔按鑷 500mL

閰嶅埗锛氬湪姘翠腑婧惰В涓婅堪鎴愬垎鍚庯紝浜?.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傚偍浜?鈩冨啺绠便€侟/p>

6.8 0.2mol/L纾烽吀鐩愮紦鍐叉恫(pH7.4)

鎴愬垎锛氱７閰镐簩姘㈤挔(NaH₂PO₄路2H₂O) 2.965g

纾烽吀姘簩閽?Na₂HPO₄路12H₂O) 29.015g

鍔犺捀棣忔按鑷 500mL

閰嶅埗锛氭憾瑙ｄ笂杩版垚鍒嗗悗锛屼簬0.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min銆傚偍浜?鈩冨啺绠便€侟/p>

6.9 S₉娣峰悎娑秉/p>

鎴愬垎 姣忔鍗嘢₉娣峰悎娑秉/p>

鑲漇₉100ml

鐩愭憾娑 20ml

鐏弻钂搁姘 380ml

0.2mol/L纾烽吀鐩愮紦鍐叉恫 500ml

杈呴叾II(NADP) 4mmol

6-纾烽吀钁¤悇绯?G-6-P) 5mmol

閰嶅埗锛氬皢杈呴叾II鍜?-纾烽吀钁¤悇绯栫疆浜庣伃鑿屼笁瑙掔摱鍐呯О閲嶏紝鐒跺悗鎸変笂杩扮浉鍙嶇殑娆″簭鍔犲叆鍚勭鎴愬垎锛 浣胯倽S₉鍔犲埌宸叉湁缂撳啿娑茬殑婧舵恫涓€傝娣峰悎娑插繀椤讳复鐢ㄧ幇閰嶏紝骞朵繚瀛樹簬鍐版按娴翠腑銆傚疄楠岀粨鏉燂紝鍓╀綑S₉娣峰悎娑插簲璇ヤ涪寮冦€侟/p>

6.10 鑿屾牚閴村畾鐢ㄥ拰鐗规畩鐢ㄩ€旇瘯鍓侟/p>

6.10.1 缁勬皑閰糕€旂敓鐗╃礌骞虫澘

鎴愬垎锛氱惣鑴傜矇 15g

钂搁姘 944mL

(V-B)鍩瑰吇鍩篍 20mL

20%钁¤悇绯 20mL

鐏弻鐩愰吀缁勬皑閰告按婧舵恫(0.5g/100mL) 10mL

鐏弻0.5mmol/L鐢熺墿绱犳憾娑 6mL

閰嶅埗锛氶珮鍘嬬伃鑿岀惣鑴傚拰姘村悗锛屽皢鐏弻20%钁¤悇绯栵紝V-B鍩瑰吇鍩哄拰缁勬皑閰告憾娑插姞杩涚儹鐨勭惣鑴傛憾娑蹭腑銆傚緟婧舵恫绋嶄负鍐峰嵈鍚庯紝鍔犲叆鐏弻鐢熺墿绱狅紝娣峰寑锛屾祰鍒跺钩鏉裤€侟/p>

6.10.2 姘ㄨ媱闈掗湁绱犲钩鏉垮拰姘ㄨ媱闈掗湁绱?鍥涚幆绱犲钩鏉军/p>

鎴愬垎锛氱惣鑴傜矇 15g

钂搁姘 940mL

(V-B)鐩愭憾娑 20mL

20%钁¤悇绯 20mL

鐏弻鐩愰吀缁勬皑閰告憾娑?0.5g/100mL) 10mL

鐏弻0.5mmol/L鐢熺墿绱犳憾娑 6mL

姘ㄨ媱闈掗湁绱犳憾娑?8mg/mL浜?.02mol/LNaOH涓? 3.15mL

鍥涚幆绱犳憾娑?8mg/mL浜?.02mol/L HCl涓? 0.25mL

閰嶅埗锛氱惣鑴傚拰姘撮珮鍘嬬伃鑿?0min锛屽皢鏃犺弻鐨勮憽钀勭硸銆乂B鐩愭憾娑插拰缁勬皑閰糕€旂敓鐗╃礌婧舵恫鍔犺繘鐑殑婧舵恫涓幓锛屾贩鍖€銆傚喎鍗磋嚦澶х害50鈩冿紝鏃犺弻鏉′欢涓嬪姞鍏ュ洓鐜礌婧舵恫鍜?鎴栨皑鑻勯潚闇夌礌婧舵恫銆侟/p>

搴旇鍦ㄥ€炬敞鐞艰剛骞虫澘鍚庡嚑澶╁唴锛屽埗澶囦富骞虫澘銆侟/p>

6.10.3 钀ュ吇鐞艰剛骞虫澘

鎴愪唤锛氱惣鑴傜矇 7.5g

钀ュ吇鑲夋堡鍩瑰吇鍩 500mL

閰嶅埗锛氫簬0.103MPa涓嬮珮鍘嬬伃鑿?0min鍚庡€炬敞骞虫澘銆侟/p>

7 璇曢獙鑿屾牚鍙婂叾鐢熺墿瀛︾壒鎬ч壌瀹欬/strong>

7.1 璇曢獙鑿屾牚

閲囩敤TA97銆乀A98銆乀A100鍜孴A102涓€缁勬爣鍑嗘祴璇曡弻鏍€侟/p>

7.2 鐢熺墿瀛︾壒鎬ч壌瀹欬/p>

鏂拌幏寰楃殑鎴栭暱鏈熶繚瀛樼殑鑿岀锛屽湪璇曢獙鍓嶅繀椤昏繘琛岃弻鏍殑鐢熺墿鐗规€ч壌瀹氥€傝弻鏍壌瀹氱殑鍒ゆ柇鏍囧噯锛屽琛?鎵€绀恒€侟/p>

琛? 璇曢獙鑿屾牚閴村畾鐨勫垽鏂爣鍑咟/p>

鑿屾牚	缁勬皑閰哥己闄饵/td>	鑴傚绯栧睆闅滅己鎹烖/td>	姘ㄨ媱闈掗湁绱犳姉鎬?/td>	鍒囬櫎淇缂烘崯	鍥涚幆绱犳姉鎬?/td>	鑷彂鍥炲彉鑿岃惤鏁?
TA97 TA98 TA100 TA102	+ + + +	+ + + +	+ + + +	+ + + -	- - - +	90-180 30-50 100-200 240-320
娉?/td>	鈥?鈥濊〃绀洪渶瑕佺粍姘ㄩ吀	鈥?鈥濊〃绀哄叿鏈塺fa绐佸彉	鈥?鈥濊〃绀哄叿鏈塕鍥犲瓙	鈥?鈥濊〃绀哄叿鏈夆柍uvrB绐佸彉	鈥?鈥濊〃绀哄叿鏈塸AQ1璐ㄧ矑	*鍦ㄤ綋澶栦唬璋㈡椿鍖栨潯浠朵笅鑷彂鍥炲彉鑿岃惤鏁扮暐澧濣/td>

7.2.1 缁勬皑閰哥己闄饵/p>

鍘熺悊锛氱粍姘ㄩ吀缂洪櫡鍨嬭瘯楠岃弻鏍湰韬笉鑳藉悎鎴愮粍姘ㄩ吀锛屽彧鑳藉湪琛ュ厖缁勬皑閰哥殑鍩瑰吇鍩轰笂鐢熼暱锛岃€屽湪缂轰箯缁勬皑閰哥殑鍩瑰吇鍩轰笂锛屽垯涓嶈兘鐢熼暱銆侟/p>

閴村畾鏂规硶锛氬皢娴嬭瘯鑿屾牚澧炶弻娑插垎鍒簬鍚粍姘ㄩ吀鍩瑰吇鍩哄钩鏉垮拰鏃犵粍姘ㄩ吀骞虫澘涓婂垝绾匡紝浜?7鈩冧笅鍩瑰吇24h鍚庤瀵熺粨鏋溿€侟/p>

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7.2.2 鑴傚绯栧睆闅滅己鎹烖/p>

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7.2.4 绱绾挎晱鎰熸€?/p>

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7.2.5 鍥涚幆绱犳姉鎬?/p>

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7.2.6 鑷彂鍥炲彉

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11 璇曢獙鎿嶄綔姝ラ

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