半岛bd体育手机客户端 说明
一般描述
热不稳定性的尿嘧啶-DNA糖基化酶含有于海洋细菌BMTU 3346中发现的同名酶。和来自大肠杆菌的UNG类似,它可水解单链或双链DNA中的尿嘧啶-糖苷键、切除尿嘧啶并在DNA中产生碱敏感的无碱基位点。这些无碱基位点可通过核酸内切酶、加热或碱处理进行水解。根据DNA制备方式,尿嘧啶-DNA糖基化酶可用于实现常见的位点特异性或链特异性U-DNA切割。该酶表现出较低的热稳定性,因此更容易使其失活。
酶特性
BMTU 3346酶比来自大肠杆菌的相应酶(+95℃下10分钟)失活更快(+95℃下2分钟)。目前已有报道表明,来自大肠杆菌的UNG会保留部分活性,从而导致含有dU的PCR产物降解。与之相反,热不稳定性的UNG可至少在+2至+8℃孵育数小时而不降解dU-PCR产物。因此,在完成扩增后,不再需要将PCR产物立即冷冻或在 -70℃保持反应混合液。
特异性
应用
尿嘧啶-DNA糖基化酶可用于在已掺入脱氧尿苷酸残基的任何位点切割DNA。由于尿嘧啶-DNA糖基化酶的热不稳定性,该酶的主要应用是预防PCR中的残留污染。这与来自大肠杆菌的酶相反;使用了这种UNG制剂就不必在扩增后立即冷冻PCR产物或将反应混合物保持在+ 70℃。
重要提示:对于实时PCR等高灵敏度技术,我们建议选用我们针对该应用优化的的LightCycler?尿嘧啶-DNA糖基化酶。
特点和优势
质量
功能检测:通过在扩增反应前添加约105 dU(含模板),测定残留活性。UNG处理后,未检测到扩增产物。
根据目前的质量控制程序,该酶不含任何污染性活性外切或内切核酸酶,同时无RNase活性。
单位定义
一个单位的定义是在+37 ℃ 60分钟内完全降解1 μg 纯化的单链含尿嘧啶DNA(噬菌体M13,生长于大肠杆菌CJ236 dut-ung-)所需的尿嘧啶-DNA糖基化酶量。
一个Lindahl单位的定义是在+37 ℃ 1分钟内释放1 mol尿嘧啶所需的酶量。一个Lindahl单位相当于520 000个我们所定义的单位。
体积活度:1 U/μl
其他说明
用于常规实验室用途。
法律信息
LightCycler is a registered trademark of Roche
基本信息
酶学委员会(EC)编号 | 3.2.2.15 ( BRENDA | IUBMB ) |
半岛bd体育手机客户端 性质
质量水平 | 100 |
生物来源 | bacterial (marine bacterium BMTU 3346) |
形式 | solution |
包装 | pkg of 100 U (11775367001) pkg of 500 U (11775375001) |
manufacturer/tradename | Roche |
最佳pH | 8.3-8.9 |
运输 | dry ice |
储存温度 | ?20℃ |
安全信息
危险声明 | H412 |
预防措施声明 | P273 - P501 |
危险分类 | Aquatic Chronic 3 |
储存分类代码 | 12 - Non Combustible Liquids |
WGK | WGK 2 |
闪点(F) | does not flash |
闪点(C) | does not flash |
Sigma-Aldrich