Sma I

半岛bd体育手机客户端 说明

一般描述

SmaI 识别序列 *C℃*C↓GGG，并生成具有平末端的片段。

特异性

识别位点：*C ℃*CGGG
*C ℃*CGGG
限制性位点：*C ℃*C↓GGG
*C ℃*C↓GGG
热灭活：Sma I 可通过在 65℃ 孵育 15 分钟进行热灭活(最多 100 U/μg DNA)。

应用

Sma I 已用于限制性分析。在快速脉冲场凝胶电泳(PFGE)，限制性酶切消化过程中，它也被用于限制性酶混合物中。

质量

缺乏非特异性内切核酸酶活性
将 1μg λDNA 与过量的 Sma I 一起在 50μl SuRE/Cut 缓冲液 A 中孵育 16 小时。分析证书提供了不改变酶特异性模式的酶单位数量。

缺乏核酸外切酶活性
将约 5μg [3H] 标记的小牛胸腺 DNA 与 3μl Sma I 一起溶于 100μl 50mM Tris-HCl 溶液(含 10mM MgCl₂、1mM 二硫赤藓糖醇，pH 约 7.5)中，并在 +37℃ 下孵育 4 小时。根据分析证书所述，在这些条件下，检测不到放射性释放。

DNA图谱分析

不同DNA上的切割位点数

• λ: 3
• φX174: 0
• Ad2: 12
• M13mp7: 0
• pBR322: 0
• pBR328: 0
• pUC18: 1
• SV40: 0

单位定义

在总体积为 25 μl (1x)的(1x)SuRE/Cut 缓冲液A中，一个单位为在+25 ℃、1 小时内完全切割 μg λDNA 所需的酶活性。

分析说明

在 PCR 缓冲液中的活性：100%

在 PCR 混合液(Taq DNA 聚合酶缓冲液)中的相对活性为 100%。PCR 混合物含有 λDNA、引物、10 mM Tris-HCl (pH 8.3，20℃)、50 mM KCl、1.5 mM MgCl₂、200μM dNTPs,2.5 UTaq DNA 聚合酶。混合物将进行 25 次扩增循环。Pwo SuperYield DNA 聚合酶 PCR 混合物反应缓冲液中的活性为 100%。如果添加富含 GC 的溶液，则其活性保持在 100%。Pwo SuperYield DNA 聚合酶 PCR 混合物不在美国销售。
SuRE/Cut 缓冲液体系
建议使用粗体印刷的缓冲液以获得最佳活性

• A：100%
• B：0-10%
• H：0-10%
• L：0-10%
• M：0-10%

相容末端
SmaI 生成的末端与任何平端兼容。

同裂酶
该酶是 Cfr9 I、 PspA I、 XmaI 和 XmaC I 的同分异构体。

甲基化敏感性
Sma I在识别序列的三个 C 残基(°)的中间不受 5-甲基胞嘧啶的抑制。但是，其活性任何其他 C 残基(*)处受到 5-甲基胞嘧啶的抑制，或在识别序列(*C℃*C↓GGG)中任何位置受 4-甲基胞嘧啶的抑制。

孵育温度
+25℃

经PFGE测试
SmaI 已经过脉冲场凝胶电泳(在细菌染色体上)测试。对包埋在 PFGE 分析用琼脂糖中的基因组 DNA( 大肠杆菌C 600)进行切割时，我们建议每 μg DNA 使用 10 U 酶，孵育时间为 4 小时。

连接和重切割测定
将通过完全消化 1 μg λDNA 获得的 SmaI 片段与 10 μl 的 1U T4 DNA 连接酶连接，连接方法是在 66 mM Tris-HCl 溶液(含 5 mM MgCl ₂、5 mM 二硫赤藓糖醇、1 mM ATP，+20℃，pH 7.5)中在 +25℃ 下孵育 16 小时，得到 1μg λDNA 片段回收率高于 80%。
随后用 SmaI 重新酶切，得到高于 80% 的典型 λDNA × SmaI 片段。

其他说明

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

半岛bd体育手机客户端 性质

质量水平	100
形式	solution
包装	pkg of 1,000 U (10220566001 [10 U/μl]) pkg of 5,000 U (10656348001 [10 U/μl]) pkg of 5,000 U (11047639001 [40 U/μl])
manufacturer/tradename	Roche
参数	25 ℃ optimum reaction temp.
technique(s)	electrophoresis: suitable
运输	dry ice
储存温度	?20℃

组份列表

组份不可单独销售

货号	组份
	Enzyme Solution
	SuRE/Cut Buffer A 10x concentrated

安全信息

储存分类代码	12 - Non Combustible Liquids
WGK	WGK 1
闪点(F)	does not flash
闪点(C)	does not flash